MM_FS_CNJ_0072 出口禽肉中二氯二甲吡啶酚残留量检验方法

MM_FS_CNJ_0072出口 禽肉 二氯二甲吡啶酚 残留量 液相色谱法 外标法定量

MM_FS_CNJ_0072

      出口禽肉中二氯二甲吡啶酚残留量检验方法

1.适用范围

    本方法适用于出口冻鸡中二氯二甲吡啶酚残留量的检验。

2.原理概要

    用乙腈提取试样中二氯二甲吡啶酚，经氧化铝柱、阴离子交换柱净化，用带紫外检测器的液相色谱仪测定二氯二甲吡啶酚残留量，外标法定量。

3.主要试剂和仪器

3.1.主要试剂

    乙腈：紫外光谱纯；

    甲醇：紫外光谱纯；

    乙酸钠水溶液：100g/L；

    乙酸甲醇溶液：0.25%(V/V)；

    乙酸甲醇溶液：0.5%(V/V)；

    饱和银丙酮溶液；

    无水硫酸钠：650℃灼烧4h，贮于密封瓶中；

    氧化铝：层析用，中性，70～230目；

    阴离子交换树脂：Dowex 1-X8，100～200目，氯离子型。使用前按下列方法转换成乙酸根型：将100g Dowex 1-X8树脂浸入10%乙酸钠水溶液中，不时搅拌，浸泡2h后，倾入布氏漏斗中，用500mL10%乙酸钠水溶液淋洗至仅存痕量氯离子(用饱和银丙酮溶液检验，呈微混浊)，再用水淋洗至无氯离子，再依次用200mL下列溶液淋洗：甲醇、0.25%乙酸甲醇溶液、甲醇。淋洗后，贮存于试剂瓶中，加甲醇浸泡备用；

    二氯二甲吡啶酚标准溶液

        标准贮备液：称取10.0mg二氯二甲吡啶酚(含量＞99.0%)，用甲醇溶解并定容至100mL，即为100μg/mL二氯二甲吡啶酚标准贮备液；

        标准工作溶液：根据需要由标准贮备液用甲醇逐级稀释成适当浓度的标准工作溶液。

3.2.仪器和设备

    高效液相色谱仪并配有下列装置：

     a.紫外检测器；

     b.色谱数据处理机或记录仪；

    组织捣碎机；

    快速混匀器或匀浆机；

    多功能微量化样品处理仪或其他相当的仪器；

    氧化铝层析柱：30cm×1.8cm(id)，下填玻璃棉塞，柱内装约三分之一甲醇，缓缓加入15g氧化铝，用20mL甲醇预洗柱子；

    阴离子树脂交换柱：17cm×1cm(id)，下填玻璃棉塞，加入乙酸根型Dowex树脂悬浮液，使沉降后高约2～3cm，用甲醇洗之，使用前，再依次用20mL0.5%乙酸甲醇溶液和20mL甲醇洗涤；

    离心机：4000r/min；

    微量可调移液管：40～200μL，200～1000μL；

    离心管：50mL；

    微量进样器：20μL；

    高速离心机：14000r/min。

4.试样的抽取与制备

4.1.检验批

    以不超过2500件商品为一检验批。

    同一检验批的商品应具有相同特征，如：包装、标记、产地、规格和等级等。

4.2.抽样数量

4.3.抽样方法

    按规定的抽样件数，随机抽取，逐件开启。每件至少取一袋作为原始样品，总量不少于2kg，放入清洁容器内，加封后，标明标记，及时送实验室。

4.4.试样制备

    从每袋原始样品中取出部分有代表性样品，将可食部分放入高速组织捣碎机中捣碎均匀，充分混匀，用四分法缩分出不少于500g，装入清洁的容器内，加封后，标明标记。

4.5.试样保存

    将试样于－18℃冷冻保存。

注：在抽样及制样过程中，必须防止样品受到污染或发生残留物含量的变化。

5.过程简述

5.1.提取及净化

    称取约5g(精确至0.01g)试样和5g无水硫酸钠于50mL离心管中，加入25mL乙腈，于快速混匀器或匀浆机上匀浆2min，在离心机上以3000r/min离心2min。将上清液倾入下接阴离子交换柱的氧化铝柱中，使提取液通过两个净化柱净化。再用20mL乙腈提取滤渣一次，离心后同样将上清液倾入氧化铝柱中净化。待提取液全部过柱后，用20mL甲醇淋洗两个柱子，至此，弃去全部淋洗液。取下氧化铝柱，将25mL离心管置于阴离子交换柱下，用20mL0.5%乙酸甲醇溶液洗脱二氯二甲吡啶酚。于多功能微量化样品处理仪上60℃蒸干，以0.50mL甲醇溶解残渣。经高速离心(14000r/min)3min后，供液相色谱测定。

5.2.测定

5.2.1.测定色谱条件

a.色谱柱：十八烷基键合固定相(ODS)色谱柱，

10μm，25cm×4.6mm(id)；

b.流动相：乙腈-水(20＋80)，流速为1mL/min；

c.检测波长：270nm；

d.色谱柱温度：40℃；

e.进样量：20μL。

5.2.2.色谱测定

    根据样液中二氯二甲吡啶酚含量情况，选定峰高相近的标准工作溶液。标准工作溶液和样液中二氯二甲吡啶酚响应值均应在仪器检测线性范围内。对标准工作溶液和样液等体积参插进样测定，在上述色谱条件下，二氯二甲吡啶酚保留时间约为5min。

5.3.空白试验

    除不加试样外，按上述测定步骤进行。

6.结果的计算

    用色谱数据处理机，或按下式计算二氯二甲吡啶酚残留量：

式中：X——样品中二氯二甲吡啶酚含量，mg/kg；

h——样液中二氯二甲吡啶酚峰高，mm；

h_s——标准工作溶液中二氯二甲吡啶酚峰高，mm；

c——标准工作溶液中二氯二甲吡啶酚浓度，μg/mL；

m——试样量，g；

V——样液最终体积，mL。

注：计算结果需扣除空白值。

7.低限和回收率的测定

7.1.测定低限

    本方法的测定低限为0.01mg/kg。

7.2.回收率

    回收率实验数据：二氯二甲吡啶酚浓度在0.010～0.100mg/kg范围内回收率为84.1%～106.0%。

8.来源：

    SN/T  0212.1—93