地表水中浮游植物叶绿素a的测定

Apr.,2010

地表水中浮游植物叶绿素a的测定

张宗祥,　朱宇芳

(泰州市环境监测中心站,江苏泰州　225300)

摘　要:比较了研磨法和超声法测定浮游植物叶绿素a结果表明,丙酮-超声法对浮游植物叶绿素a的萃取效率优于研磨法,人为误差小、精密度较高、且简便安全。

关键词:浮游植物;叶绿素a;提取中图分类号:X832　　　文献标识码:A

DeterminationofPhytoplanktonChlorophyll-ainSurfaceWater

ZHANGZong2xiang,　ZHUYu2fang

(TaizhouEnvironmentalMonitoringCenterStation,Taizhou,Jiangsu225300,China)

Abstract:Thecomparativestudyongrindingextractionandacetone-ultrasoundextractioninthedeterminationofChlorophyll-awasconducted.Itwasfoundthatcomparedtothestandardgrindingmethod,theacetone-ultrasoundmethodhadtheimprove2mentsofartificialerror,highprecision,operationalsimplicityandsafety.Keywords:phytoplankton;chlorophyll-a;extraction引　言

叶绿素a是反映水体初级生产力的重要指标,也是湖泊富营养化评价的重要参数。测定叶绿素a的方法主要有高效液相色谱法

[1]

1.2　试剂

90%丙酮、碳酸镁粉末。1.3　实验方法

1.3.1　丙酮-研磨法　采用《水和废水监测分析(第4版)方法进行处理和分光光度分析。方法》

1.3.2　丙酮-超声法　准确量取200mL混合均匀水样,以乙酸纤维滤膜进行抽滤(负压约50kPa),水样抽完后,继续抽1～2min,尽量减少水分。抽滤完毕,滤膜于冰箱中低温干燥6～8h,

、荧光光度法

[2]

和分光光度法

[3,4]

等,其中分光光度法因操作简便

而应用广泛。萃取溶剂的选择和细胞破碎方法,是影响分光光度法测定叶绿素a的主要因素。目前,常用的萃取溶剂主要有丙酮、甲醇、乙醇和DMF

(N,N-二甲基甲酰胺)等,由于甲醇和DMF具有较强的毒性

[5]

,因此丙酮和乙醇成了目前较常用

的萃取剂;主要的细胞破碎方法有研磨、低温冻融、超声破碎等。目前在环境监测中,叶绿素a的监测方法,主要依据《水和废水监测分析方法》(第4版)[6],采用丙酮-研磨法。

为了优化叶绿素a的测定方法,提高监测数据的准确性,因此对丙酮-超声法测定叶绿素a作了探讨。1　实验部分1.1　材料

剪碎后放入具塞离心管中,加入少量碳酸镁粉末及

10mL之90%丙酮,超声破碎10min,振荡器振摇(300r/min)萃取1h,用离心机(10000r/min)离心10min,将上清液转入10mL容量瓶中,用90%丙酮定容至10mL,摇匀待测。测定和结果其计算同丙酮-研磨法。2　结果与讨论

采集不同叶绿素a浓度的水样1和2,分别采用超声法和研磨法进行处理和测定,每种方法平

收稿日期:2009-12-30

作者简介:张宗祥(1976—),男,浙江海盐人,工程师,硕士,主要从事环境监测工作。

##

可见分光光度计、抽滤装置、研钵、超声波细胞粉碎机、振荡器、离心机、0.45μm乙酸纤维滤膜。

・74　・张宗祥等1地表水中浮游植物叶绿素a的测定第23卷第2期

行测定6次。测定结果见表1。

由表1可见,与传统的丙酮-研磨法相比较,丙酮-超声法提取叶绿素a的效率和测定结果的精密度均优于丙酮-研磨法。

mg/m

65.565.1815.1614.29

3

表1　超声法与研磨法提取结果比较

样品

1#2#

提取方法超声法研磨法超声法研磨法

测定/次

15.324.7913.9212.57

25.635.3116.7515.18

35.415.5814.5814.08

45.525.2616.1815.52

55.725.4315.7816.49

平均值

5.535.2615.4214.69

相对标准偏差/%

2.65.16..2

　　这是由于在人工研磨提取过程中,样品暴露的[7]

时间比较长,而叶绿素a见光容易降解。并且在研磨法的操作中,很难将附着在研钵上的叶绿素彻底清洗,同时样品提取液在多次转移过程中,也容易造成一定的损失,影响测定结果的准确性和精密度。

文中采用的超声法操作步骤简便,整个提取过程基本在密闭容器中进行,可以有效减少叶绿素的光降解,提取效率高。另外,丙酮低毒易挥发,超声法可有效减少人工研磨操作过程中的丙酮挥发对分析人员健康的影响。实验使用具有多波长扫描功能的紫外可见分光光度计,可以一次性读取同一样品在750、663、5和630nm的吸光度值,有效地缩短了样品的

提取分析的过程,减少了叶绿素a在提取过程中的

损失,在一定程度上优于传统的丙酮-研磨法。

[参考文献]

β胡萝卜素及脱镁叶[1]　吴振斌,张兵之,张丽萍,等.叶绿素a、

绿酸a的高效液相色谱检测[J].分析化学,2006,34(9):

1359.

[2]　唐尧基,游文玮,陈　莹,等.同步荧光法测定海水中叶绿素a

的含量[J].分析仪器,2004,3:24-26.[3]　王　建,王　骥.浮游植物叶绿素与脱镁叶绿素的测定方法[J].武汉植物学研究,1984,2:321-328.

[4]　李振国,卢　军,王国祥,等.分光光度法测定浮游植物叶绿

素a的比较研究[J].中国环境监测,2006,22(2):21-23.

[5]　杨彩根,宋学宏,孙丙耀.浮游植物叶绿素a含量简易测定方

法比较[J].海洋科学,2007,31(1):6-8.

[6]　国家环境保护总局1水和废水监测分析方法[M]1第4版.

分光比色的时间,保证了测定结果的准确、精密。

文中采用的丙酮-超声法,针对丙酮-研磨法的费时、费力、不利于操作人员健康等缺点,简化了(上接第65页)

北京:中国环境科学出版社,20021670.

[7]　张武昌,王　荣.光和温度对叶绿素a和脱镁叶绿酸a降解

的影响[J].海洋科学,2000,24(4):50-52.

6　小　结

价。在环境本底数据可行的情况下,方能进行项目环境影响预测和评价,同时在叠加环境本底数据后,才具有环境可行性。

在项目建成并试运行3个月后,要对项目进行验收,这也是对项目环境影响评价的最主要的环境影响要素的预测评价和监督。其项目建成后,对环境影响是否超越了预测结果,必须进行环保验收监测。在项目运行一段时间后,需进行回顾性评价,还要进行跟踪评价。

当建设项目建成后,没有改变环境现状,说明建设项目具有环境可行性。由此说明,环境监测贯穿于环境影响评价中的评价初期、建设期、运行期及后评价期,即贯穿于环境影响评价的整个体系之中。

环境监测贯穿于项目的立项审批、项目的建设期、运行期及后评价期等全过程,是环境影响评价的技术基础,同时也具有较强的监督功能。切实做好环境监测工作,方能使环境影响评价工作真实体现其价值,实现对环境问题的源头控制。

[参考文献]

[1]　环境质量评价与环境监测[J].环境科学文摘,2008,1:20

-21.

[2]　雪抱尘.结合环境监测实际,传授环境监测技术[J].河北科

技大学学报,2004,12:7.

[3]　孙　燕.环境监测为环境管理服务,环境管理依靠环境监测

[J].环境监测管理与技术,1990,2(1):12-13.

[4]　周　涛.论环境管理启动环境监测,环境监测为环境管理服

务[J].陕西环境,1995,2(6):15-16.