(12)发明专利申请
(10)申请公布号 CN 109939234 A(43)申请公布日 2019.06.28
(21)申请号 201910198549.9(22)申请日 2019.03.15
(71)申请人 中国科学院上海高等研究院
地址 201210 上海市浦东新区海科路99号 申请人 中国科学院大学
(72)发明人 刘雨薇 薛梦竹 王鹏 (74)专利代理机构 上海光华专利事务所(普通
合伙) 31219
代理人 许亦琳 余明伟(51)Int.Cl.
A61K 45/00(2006.01)A61K 45/06(2006.01)A61P 35/00(2006.01)C12Q 1/6886(2018.01)
权利要求书1页 说明书5页 附图2页
(54)发明名称
FOXP1基因及其抑制剂在制备抑制肺癌转移药物中的用途(57)摘要
本发明提供一种FOXP1基因及其抑制剂在制备抑制肺癌转移药物中的用途。基于研究发明人发现FOXP1动态高表达与肺癌的转移相联系。通过检测肺癌细胞中FOXP1动态表达水平的变化，识别出FOXP1动态高表达的肺癌癌株，并可进一步预测出该类肺癌株转移可能性；通过抑制间充质肺癌细胞中的FOXP1，增加了肺癌细胞的间充质向上皮的进程，抑制了肺癌的转移。本发明对于肺癌的诊断和治疗具有十分积极的意义。
CN 109939234 ACN 109939234 A
权 利 要 求 书
1/1页
1.FOXP1基因抑制剂在制备或者筛选抑制肺癌转移药物中的用途。2.根据权利要求1所述的用途，其特征在于：所述肺癌为FOXP1动态高表达型肺癌。3.一种抑制肺癌转移的药物，其特征在于：所述药物中包含有效治疗量的FOXP1基因抑制剂。
4.一种抑制肺癌转移联合治疗药物组合物，其特征在于：所述组合物包括有效量的FOXP1基因抑制剂和至少一种其他肺癌治疗药物。
5.FOXP1在制备或者筛选肺癌转移诊断试剂中的用途。6.FOXP1特异性识别剂在制备肺癌转移诊断试剂中的用途。7.一种肺癌转移诊断试剂，其特征在于，所述试剂盒中含有特异性识别FOXP1的试剂。8.根据权利要求7所述的肺癌转移诊断试剂，其特征在于：所述肺癌为FOXP1动态高表达型肺癌。
9.FOXP1作为生物标志物的用途。
10.一种筛选抑制肺癌转移药物的方法，所述方法包括：(1)用候选物质处理表达FOXP1的体系；和(2)检测所述体系中FOXP1的表达。
2
CN 109939234 A
说 明 书
1/5页
FOXP1基因及其抑制剂在制备抑制肺癌转移药物中的用途
技术领域
[0001]本发明涉及一种FOXP1基因及其抑制剂在制备抑制肺癌转移药物中的用途。背景技术
[0002]恶性肿瘤是威胁人民健康的最大危险因素之一，我国每年仅肿瘤死亡人数近200万人，而全球肺癌发病率自20世纪70年代末开始一直呈上升趋势。肺癌是发病率和死亡率增长最快，对人群健康和生命威胁最大的恶性肿瘤之一。近50年来许多国家都报道肺癌的发病率和死亡率均明显增高，男性肺癌发病率和死亡率均占所有恶性肿瘤的第一位，女性发病率占第二位，死亡率占第二位。肺癌的病因至今尚不完全明确，大量资料表明，长期大量吸烟与肺癌的发生有非常密切的关系。[0003]FOXP1基因序列可参考NCBIID：27086，该基因属于FOX转录家族中的P亚家族。[0004]关于肺癌与FOXP1之间的关系尚未报道。
发明内容
[0005]鉴于以上所述现有技术的缺点，本发明的目的在于提供一种FOXP1在诊断和抑制肺癌转移中用途，用于解决现有技术中肺癌转移的诊断预测和治疗中的难点。[0006]基于研究发明人发现FOXP1动态高表达与肺癌的转移相联系。通过检测肺癌细胞中FOXP1动态表达水平的变化，识别出FOXP1动态高表达的肺癌癌株，并可进一步预测出该类肺癌株转移可能性；通过抑制间充质肺癌细胞中的FOXP1，增加了肺癌细胞的间充质向上皮的进程，抑制了肺癌的转移。为实现上述目的及其他相关目的，发明人提供了以下方案：[0007]本发明一方面提供一种FOXP1基因抑制剂在制备或者筛选抑制肺癌转移药物中的用途。
[0008]进一步地，所述肺癌为FOXP1动态高表达型肺癌。[0009]进一步地，所述FOXP1动态高表达具体是指TPM高于1000的肺癌细胞，TPM是指每百万细胞中的转录本数。
[0010]上述FOXP1基因抑制剂可以降低FOXP1基因的表达。[0011]较佳地，所述FOXP1基因抑制剂可完全抑制FOXP1的表达。[0012]FOXP1基因抑制剂可以是siRNA，shRNA，抗体，小分子化合物。[0013]所述药物必然包括FOXP1基因抑制剂，并以FOXP1基因抑制剂作为前述功用的有效成分。
[0014]所述药物中，发挥前述功用的有效成分可仅为FOXP1基因抑制剂，亦可包含其他可起到类似功用的分子。[0015]亦即，FOXP1基因抑制剂为所述药物的唯一有效成分或有效成分之一。[0016]所述药物可以为单成分物质，亦可为多成分物质。[0017]所述药物的形式无特殊限制，可以为固体、液体、凝胶、半流质、气雾等各种物质形式。
3
CN 109939234 A[0018]
说 明 书
2/5页
所述药物主要针对的对象为哺乳动物，如啮齿类动物、灵长类动物等。
[0019]所述肺癌转移可以是肺癌术后或者放化疗之后的肺癌转移。[0020]本发明的另外一个方面提供了一种抑制肺癌转移的药物，所述药物中包含有效治疗量的FOXP1基因抑制剂。
[0021]所述药物必然包括FOXP1基因抑制剂，并以FOXP1基因抑制剂作为前述功用的有效成分。
[0022]所述药物中，发挥前述功用的有效成分可仅为FOXP1基因抑制剂，亦可包含其他可起到类似功用的分子。[0023]亦即，FOXP1基因抑制剂为所述药物的唯一有效成分或有效成分之一。[0024]所述药物可以为单成分物质，亦可为多成分物质。[0025]所述药物的形式无特殊限制，可以为固体、液体、凝胶、半流质、气雾等各种物质形式。
[0026]所述药物主要针对的对象为哺乳动物，如啮齿类动物、灵长类动物等。[0027]进一步地，所述肺癌是指FOXP1基因动态高表达型肺癌。[0028]本发明的另外一个方面提供了一种抑制肺癌转移的方法，为向对象施用FOXP1基因抑制剂。
[0029]所述的对象可以为哺乳动物或哺乳动物的肺癌细胞。所述哺乳动物优选为啮齿目动物、偶蹄目动物、奇蹄目动物、兔形目动物、灵长目动物等。所述灵长目动物优选为猴、猿或人。
[0030]所述对象可以是罹患肺癌的患者或者期待抑制肺癌转移的个体。或者所述对象为肺癌患者或者期待抑制肺癌转移的离体肺癌细胞。
[0031]所述FOXP1基因抑制剂可以在接受肺癌治疗前、中、后向对象施用。[0032]本发明的另外一方面，提供一种抑制肺癌转移联合治疗药物组合物，所述组合物包括有效量的FOXP1基因抑制剂和至少一种其他肺癌治疗药物。[0033]所述联合治疗药物组合可以是以下形式中的任意一种：
[0034]一)将FOXP1基因抑制剂和其他肺癌治疗药物分别制成独立的制剂，制剂的剂型可相同或不同，给药途径亦可相同或不同。[0035]当其他肺癌治疗药物为抗体时，一般采用胃肠外给药型。当其他肺癌治疗药物为化学药物时，给药形式可以比较丰富，可以是胃肠道给药亦可以是非胃肠道给药。一般推荐针对各化学药物的已知给药途径给药。
[0036]二)将FOXP1基因抑制剂和其他肺癌治疗药物配置成复方制剂，在将FOXP1基因抑制剂和其他肺癌治疗药物采用相同给药途径给药并同时施加时，可采用将两者配置成复方制剂的形式。
[0037]进一步地，所述肺癌治疗可以是抑制肺癌增值、肿瘤血管增生的药物，也可以是其他具有抑制肺癌转移功能的药物。[0038]本发明的另外一方面，提供一种抑制肺癌转移的方法，为向对象施用有效量的FOXP1基因抑制剂以及向对象施用有效量的其他抑制肺癌转移药物和/或向对象实施其他抑制肺癌转移手段。
[0039]可以同步地或顺序地给予有效量的FOXP1基因抑制剂和至少一种有效量的其他抑
4
CN 109939234 A
说 明 书
3/5页
制肺癌转移药物。
[0040]基于FOXP1基因为本发明首次发现的抑制肺癌转移靶点，在与FOXP1基因抑制剂以外的其他抑制肺癌转移药物联合用药中，至少可以起到疗效相加的效果，进一步增强抑制肺癌转移作用。
[0041]其他的抑制肺癌转移药物包括但不限制于：抗体药物、化学药物或靶向型药物等。[0042]所述FOXP1基因抑制剂可以是胃肠道给药或者胃肠外给药。所述其他抑制肺癌转移药物可以是胃肠道给药或者胃肠外给药。对于抗体药物，一般采用胃肠外给药。[0043]本发明另外一个方面，提供FOXP1基因抑制剂在制备具有以下任一项或多项作用的药物中的用途：抑制肺癌细胞的增殖速率、改变肺癌细胞周期分布、抑制肺癌组织生长。[0044]本发明的另外一个方面提供了FOXP1在制备或者筛选肺癌转移诊断试剂中的用途。
[0045]进一步地，所述FOXP1为生物标志物或者血清生物标志物。[0046]上述内容包括两方面，其一：FOXP1用于制备肺癌转移诊断诊断试剂，是指将FOXP1作为肺癌转移诊断指标应用于肺癌转移诊断试剂的制备，可将FOXP1作为标准品或者阳性对照，用于血清中FOXP1的检测；其二：FOXP1用于筛选肺癌转移诊断试剂是指将FOXP1作为肺癌识别靶标筛选特异性识别FOXP1的试剂，从而作为肺癌转移诊断试剂，来检测FOXP1基因高表达型肺癌。
[0047]本发明的另外一个方面提供了FOXP1的特异性识别剂在肺癌转移诊断中的用途。FOXP1可以作为一种生物标志物。
[0048]本发明的另外一个方面提供了FOXP1特异性识别剂在制备肺癌转移诊断试剂中的用途。
[0049]FOXP1特异性识别剂是指能够特异性结合FOXP1的抗体或者配体。进一步地，所述抗体是单克隆抗体或者多克隆抗体。
[0050]本发明的另外一个方面提供了一种肺癌转移诊断试剂，所述试剂盒中含有特异性识别FOXP1的试剂。
[0051]本发明的另外一个方面提供一种筛选抑制肺癌转移药物的方法，所述方法包括：[0052](1)用候选物质处理表达FOXP1的体系；和[0053](2)检测所述体系中FOXP1的表达。[0054]如上所述，本发明的FOXP1基因抑制剂在制备抑制肺癌转移药物中的用途，具有以下有益效果：
[0055]通过研究发现，FOXP1高表达是肺癌细胞转移能力增加的标志，使用抑制剂抑制FOXP1的表达，能有效抑制肺癌转移，抑制转移的程度与抑制FOXP1的程度成正比。附图说明
[0056]图1显示为对转移中间态肺癌细胞A549进行经典TGFb诱导后，上皮细胞向间间充质转变的示意图；
[0057]图2显示为对转移中间态肺癌细胞A549进行上皮间充质诱导后，FOXP1的表达量上升示意图；
[0058]图3显示为对转移中间态肺癌细胞A549进行上皮间充质诱导后，再抑制FOXP1能使
5
CN 109939234 A
说 明 书
4/5页
对转移中间态肺癌细胞A549回到上皮状态示意图。
具体实施方式
[0059]以下通过特定的具体实例说明本发明的实施方式，本领域技术人员可由本说明书所揭露的内容轻易地了解本发明的其他优点与功效。本发明还可以通过另外不同的具体实施方式加以实施或应用，本说明书中的各项细节也可以基于不同观点与应用，在没有背离本发明的精神下进行各种修饰或改变。须知，下列实施例中未具体注明的工艺设备或装置均采用本领域内的常规设备或装置。
[0060]在进一步描述本发明具体实施方式之前，应理解，本发明的保护范围不局限于下述特定的具体实施方案；还应当理解，本发明实施例中使用的术语是为了描述特定的具体实施方案，而不是为了限制本发明的保护范围；在本发明说明书和权利要求书中，除非文中另外明确指出，单数形式“一个”、“一”和“这个”包括复数形式。[0061]当实施例给出数值范围时，应理解，除非本发明另有说明，每个数值范围的两个端点以及两个端点之间任何一个数值均可选用。除非另外定义，本发明中使用的所有技术和科学术语与本技术领域技术人员通常理解的意义相同。除实施例中使用的具体方法、设备、材料外，根据本技术领域的技术人员对现有技术的掌握及本发明的记载，还可以使用与本发明实施例中所述的方法、设备、材料相似或等同的现有技术的任何方法、设备和材料来实现本发明。
[0062]FOXP1，其序列可参考NCBIID：27086。[0063]研究发现：FOXP1动态高表达表示肺癌细胞的上皮间充质进程加快，而上皮间充质的转变在90％的肿瘤转移中都会发生，故表明，FOXP1动态高表达是肺癌细胞转移能力增加的标志物。实验发现，对转移能力增加的MCF10A进行敲除FOXP1，能使间充质细胞回到上皮状态，可见对FOXP1基因高表达型肺癌抑制其转移具有显著的治疗意义。[0064]FOXP1基因抑制剂
[0065]FOXP1基因抑制剂具有抑制FOXP1基因表达的功能的物质。可对于FOXP1基因具有抑制作用包括但是不限于：降低FOXP1基因的转录或者表达。[0066]利用FOXP1基因的抑制剂为主要活性成份或者主要活性成份之一制备的肿瘤治疗药物。通常，药物中除了有效成份，根据不同剂型的需要，还会包括一种或者多种药学上可接受的载体或者辅料。
[0067]“药学上可接受的”是指当分子本体和组合物适当的给予动物或者人时，他们不会产生不利的、过敏的或者其他不良反应。[0068]“药学上可接受的辅料”是指应当与FOXP1抑制剂相容，即能与其共混而不会在通常情况下大幅度降低药物组合物的效果。可作为药学上可接受的载体或辅料的一些物质的具体例子是糖类，如乳糖、葡萄糖和蔗糖；淀粉，如玉米淀粉和土豆淀粉；纤维素及其衍生物，如甲基纤维素钠、乙基纤维素和甲基纤维素；西黄蓍胶粉末；麦芽；明胶；滑石；固体润滑剂，如硬脂酸和硬脂酸镁；硫酸钙；植物油，如花生油、棉籽油、芝麻油、橄榄油、玉米油和可可油；多元醇，如丙二醉、甘油、山梨糖醇、甘露糖醇和聚乙二醇；海藻酸；乳化剂，如Tween；润湿剂，如月桂基硫酸钠；着色剂；调味剂；压片剂、稳定剂；抗氧化剂；防腐剂；无热原水等，渗盐溶液；和磷酸盐缓冲液等。这些物质根据需要用于帮助配方的稳定性或有助于提高活
6
CN 109939234 A
说 明 书
5/5页
性或它的生物有效性或在口服的情况下产生可接受的口感或气味。[0069]联合治疗药物组合和施用方法：
[0070]所述联合治疗药物组合可以是以下形式中的任意一种：
[0071]一)将FOXP1基因抑制剂和其他肺癌治疗药物分别制成独立的制剂，制剂的剂型可相同或不同，给药途径亦可相同或不同。使用时，可几种药同时使用，也可几种药先后使用。先后给药时，应当在先用药物仍对机体有效的期间内向机体施加其他药物。[0072]二)将FOXP1基因抑制剂和其他肺癌治疗药物配置成复方制剂，在FOXP1基因抑制剂和其他肺癌治疗药物采用相同给药途径给药并同时施加时，可采用将两者配置成复方制剂的形式。
[0073]可以同步地或顺序地给予有效量的FOXP1基因抑制剂和至少一种有效量的其他肺癌治疗药物。
[0074]使用时，可将有效量的FOXP1基因抑制剂和有效量的其他肺癌治疗药物同时使用，也可将有效量的FOXP1基因抑制剂和有效量的其他肺癌治疗药物先后使用。先后给药时，应当在先用药物仍对生物体有效的期间内向生物体施加其他药物。
[0075]实施例一对转移中间态的肺癌细胞A549诱导后其转移能力增加[0076]对A549细胞加入TGF-β(4ng/ml，购自Invitrogen)进行诱导，TGF-β使用细胞完全
培养基配制，诱导过程中每天更换一次含TGF-β的培养基。细胞经过48小的的诱导后，即可发生形态变化，进行间充质状态，可通过显微镜观察。[0077]结果如图1所示，A为中间态A549细胞，B为诱导过后的A549细胞，可见A549细胞可从中间态诱导到转移状态。
[0078]实施例二转移中间态的肺癌细胞A549过表达FOXP1可增加其转移能力[0079]对A549细胞通过瞬时转染的方法，使用lipofactamine 2000,以每100万个细胞转染5ug外源DNA的量转入FOXP1过表达质粒。细胞经过48小的的诱导后，即可发生形态变化，进行间充质状态。
[0080]通过显微镜观察，结果如图2所示，可见对照组转入仅有过表达载体的对照质粒Vector,则发现细胞形态没有变化。实验组的细胞形态发生显著变化，进行间充质状态。[0081]实施例三对转移能力增加的A549细胞进行敲除FOXP1能使间充质细胞回到上皮状态
[0082]对发生了转移的A549细胞，使用RNA I的方法，敲除FOXP1。[0083]结果如图3所示，可发现代表上皮的标志物CDH1表达上调，而代表间充质的标志物CDH2下调，说明细胞回到上皮状态。
[0084]以上的实施例是为了说明本发明公开的实施方案，并不能理解为对本发明的限制。此外，本文所列出的各种修改以及发明中方法、组合物的变化，在不脱离本发明的范围和精神的前提下对本领域内的技术人员来说是显而易见的。虽然已结合本发明的多种具体优选实施例对本发明进行了具体的描述，但应当理解，本发明不应仅限于这些具体实施例。事实上，各种如上所述的对本领域内的技术人员来说显而易见的修改来获取发明都应包括在本发明的范围内。
7
CN 109939234 A
说 明 书 附 图
1/2页
图1
图2
8
CN 109939234 A
说 明 书 附 图
2/2页
图3
9
因篇幅问题不能全部显示，请点此查看更多更全内容