不同产地党参苍术内酯_和党参炔苷含量测定

DOI:10.3969/J.ISSN.1007-6611.2010.08.010

山西医科大学学报(JShanxiMedUniv)2010年8月,41(8)

不同产地党参苍术内酯Ó和党参炔苷含量测定

杨 静, 苏 强, 刘恩荔, 高建平 (山西医科大学药学院中药学教研室, 太原 030001;

mai:ljpgao123@sina.com)

摘要: 目的 通过对不同产地党参及不同产地党参引种到山西陵川GAP种植基地党参药材苍术内酯Ó和党参炔苷2种化学成分的比较研究,探讨环境因素对党参化学成分的影响。 方法 采用HPLC方法,以党参炔苷和苍术内酯Ó为检测指标,对不同产地党参及不同产地党参引种到山西种植基地党参药材进行了含量测定和比较分析。 结果 在选择的色谱条件下,苍术内酯Ó的线性范围为0.10-1.6Lg(r=0.9994),平均回收率为103.0%,RSD为0.02%(n=6);党参炔苷的线性范围为0.01-2.0Lg(r=0.9999),平均回收率为100%,RSD为2.1%(n=6)。不同产地党参间苍术内酯Ó、党参炔苷含量不同,引种后苍术内酯Ó含量都较原产地高,湖北恩施板桥党和甘肃陇西白条党党参炔苷含量增高。 结论 党参化学成分受环境因素的影响,山西自然环境条件适宜党参种植。关键词: 党参; 产地; 党参炔苷; 苍术内酯Ó

中图分类号: R927.2 文献标志码: A 文章编号: 1007-6611(2010)08-0698-05AssayoflobetyolinandatractylenoideÓinRadixCodonopsisfromdifferenthabitats

*YANGJing,SUQiang,LIUEn-l,iGAOJian-ping(DeptofTraditionalChineseMedicine,CollegeofPharmacy,ShanxiMedicalUni-

*

*

通讯作者,E-

versity,Taiyuan030001China;

*

Correspondingauthor,E-mail:jpgao123@sina.com)

Abstract: Objective TodeterminethecontentsoflobetyolinandatractylenoideÓinRadixCodonopsisfromdifferenthabitats,andtoexploretheeffectofenvironmentonthechemicalconstituentsofRadixCodonopsis. Methods Thecontentsoflobetyolinandatracty-lenolideÓintheRadixCondonopsiscultivatedinthesamehabitbutfromdifferentoriginalhabitweredetectedbyHPLC. Results Underthechosenconditions,thereweregoodlinearrelationshipsbetweentheinputquantityandthepeakareasoflobetyolinandatrac-tylenoideÓintherangesof0.10-1.6Lg(r=0.9994)and0.01-2.0Lg(r=0.9999),respectively.ThemeanrecoveryratesoflobetyolinandatractylenoideÓwere103.0%and100%,respectively.RSDwere0.02%(n=6)and2.1%(n=6),respectively.ThecontentsoflobetyolinandatractylenoideÓshowedsignificantdifferencefromdifferentoriginalhabitats.ThecontentsoflobetyolinandatractylenolideÓintheRadixCodonopsisfromdifferentoriginalhabitatsshowedsignificantchangesafterbeingintroduced. Conclu-sion EnvironmentalconditionshaveasignificantinfluenceonthechemicalconstituentsofRadixCodonopsis.Thenaturalenvironmen-talconditionsofShanxiaresuitableforthecultivationandintroduction.Keywords: RadixCodonopsis; habitat;

lobetyolin; atractylenoideÓ

党参(RadixCodonopsis)为桔梗科党参属植物,干燥根入药。主产于山西、陕西、甘肃、四川等省及东北各地

[1,2]

分含量测定,探讨不同产地党参化学成分变化规律

及与生态环境的关系,比较不同产地党参的质量,为党参的进一步规范化生产提供科学依据。1 材料、试剂与仪器

标准品:苍术内酯Ó(批号:080316,北京经科宏达生物公司);党参炔苷标准品(批号:080329,上海融合科技医药有限公司);甲醇(色谱纯,天津市四友精细化学品有限公司);乙睛(色谱纯,天津市科密欧化学试剂开发中心);甲醇(分析纯,天津市科密欧化学试剂开发中心);高纯水。实验用党参药材见表1。

Agilent1200高效液相色谱仪(AgilentC18柱,

。关于党参的化学成分已有很多的研

究报道,只局限于党参药材中单纯党参内酯Ó与党参炔苷的含量测定,但相关性及生态环境因素的影

[3-5]

响尚未见报道。山西作为党参的一个道地产区,为寻找不同产地党参的化学变异规律,探讨党参活性成分变异与生态环境的关系。本项目采用平行比较的方法,将不同产地党参种植于山西陵川党参规范化种植管理(GAP)基地,进行一致的栽培管理,以采自山西陵川党参GAP种植基地的党参药材和不同原产地的党参药材为研究对象,通过有效成

基金项目: 山西省自然基金资助项目(20051086);山西省科技攻关项目(2006031087-10)

山西医科大学学报(JShanxiMedUniv)2010年8月,41(8) 150mm@4.6mm,5Lm);电子分析天平(型号:HANGPNGFA2004,上海精密仪器有限公司生产);

表1 实验用党参药材来源

Tab1 RadixCondonopsisusedforexperiments样品采集地山西陵川党参GAP种植基地

序号123456710

不同产地

111213141516

原产地 山西陵川山西农大甘肃文县内蒙山西平顺山西五台甘肃陇西湖北恩施陕西四川

山西平顺老马岭山西沁源山西壶关甘肃陇西湖北恩施陕西

植物基源 CodonopsispilosulaCodonopsispilosula

Codonopsispilosulavar.modestaCodonopsispilosulaCodonopsispilosulaCodonopsispilosulaCodonopsispilosulaCodonopsistangshenCodonopsispilosula

Codonopsispilosulavar.modestaCodonopsispilosulaCodonopsispilosulaCodonopsispilosulaCodonopsispilosulaCodonopsistangshenCodonopsispilosula

商品名称潞党潞党纹党口党潞党台党白条党板桥党凤党刀党潞党潞党潞党白条党板桥党

生长年限/年

222222222222222.5多年野生

#699#

超声清洗机(型号:SK8250H,工作频率59kHz,消耗功率250W,上海科导超声仪器有限公司生产)。

采集时间2007.112007.112007.112007.112007.112007.112007.112007.112007.112007.112009.072009.112009.072009.092009.062009.08

凤党

2 方法与结果

2.1 色谱条件2.1.1 苍术内酯Ó色谱条件 色谱柱为AgilentC18柱(150mm@4.6mm,5Lm)。流动相为甲醇B水(65B35,V/V);流速1.0ml/min,检测波长为220nm

[7,8]

甲醇B水(65B35,V/V)为流动相,流速1.0ml/min和

以乙腈B水(28B72,V/V);流速1.0ml/min,峰型分离度较为理想,故最后确定流动相为甲醇B水(65B35),流速为1.0ml/min。2.4 线性范围的考察 取0.1mg/ml的苍术内酯Ó对照品溶液,依次稀释为80Lg/m,l40Lg/m,l20Lg/m,l10Lg/m,l5Lg/m,l进样20L,l结果见表2。以峰面积值(Y)对进样量(X)进行回归,得回归方程为Y=3706.1X-2.7225,相关系数为r=0.9994。

表2 苍术内酯Ó对照品线性关系考察结果

Tab2 Studyonthelinearrelationshipofthereference

substanceofatractylenoideÓ序号

12345

进样量/Lg

0.1

0.20.40.81.6

峰面积/mAU

397.7753.41390.33014.55919.6

。

2.1.2 党参炔苷色谱条件 色谱柱为AgilentC18柱(150mm@4.6mm,5Lm)。流动相为乙腈B水(28B72,V/V);流速1.0ml/min,检测波长定为267nm

[9-12]

。

在选定条件下,色谱峰能达到基线分离,苍术内酯Ó和党参炔苷与相邻色谱峰的分离度大于1.5。2.2 检测波长的选择 对苍术内酯Ó及党参炔苷的甲醇溶液作全波长扫描,结果显示,对照品苍术内酯Ó在220nm处有最大吸收,同时参照文献[7,8]将苍术内酯Ó检测波长定为220nm。党参炔苷在214nm、232nm、267nm、283nm均有吸收,经实验比较同时参照文献[9-12]将党参炔苷检测波长定为267nm。

2.3 流动相的选择 分别选用甲醇-水、乙睛-水为流动相系统,并调整各流动相比例及流速,发现以并以峰面积值(Y)对进样量(X)作图,得一直线,苍术内酯Ó在0.1-1.6Lg范围内与峰面积呈良好的线性,见图1。#700# 山西医科大学学报(JShanxiMedUniv)2010年8月,41(8)

2.5 供试品溶液的制备 将党参药材进行粉碎,过40目筛。16种药材共制样品粉末16份。2.5.1 苍术内酯Ó供试品溶液的制备 精密称取党参粉末2g,精密称定,置具塞锥形瓶中,精密加入甲醇50m,l称定重量,超声处理30min,放冷,再称定重量,用甲醇补充减失的重量摇匀,滤过,精密量取续滤液25m,l减压蒸干,残渣用甲醇溶解并转移至5ml容量瓶中,加甲醇稀释至刻度,摇匀,用微孔

图1 苍术内酯Ó线性关系图

滤膜(0.45Lm)过滤,取续滤液,即得。

2.5.2 党参炔苷供试品溶液的制备 精密称取党参粉末0.5g,加入25ml的甲醇,精密称定重量。超声处理30min,放冷称定重量,加甲醇补足减失的重量。摇匀静置,取上清液,用微孔滤膜(0.45Lm)过滤,取续滤液,即得。2.6 方法学验证

2.6.1 精密度实验 精密吸取同一苍术内酯Ó对照品溶液,注入高效液相色谱仪,连续进样5次,RSD=0.44%。

精密吸取同一党参炔苷对照品溶液,注入高效液相色谱仪,连续进样5次,RSD=1.55%。2.6.2 稳定性实验 精密吸取党参测苍术内酯Ó同一样品溶液,分别于0,2,6,12,18,24h注入高效液相色谱仪。峰面积分别为886.9,906.7,6.5,886.3,875.9,0.9,RSD为1.2%。结果表明,样品中的苍术内酯Ó在24h内稳定。

精密吸取党参测党参炔苷同一样品溶液,分别于0,2,6,12,18,24h时注入高效液相色谱仪。峰面积分别为146.8,136.6,135.9,135.8,140.9,138.7,RSD为3.04%。结果表明,样品中的党参炔苷在24h内稳定。

2.6.3 重复性实验 精密称取党参粉末5份,每份2g,按2.5项下的处理方法处理,得苍术内酯Ó供试品溶液,注入高效液相色谱仪,按峰面积与进样量的比值计算,RSD为1.1%;精密称取党参粉末5份,每份0.5g,按2.5项下的处理方法处理,得党参炔苷供试品溶液,注入高效液相色谱仪,按峰面积与进样量的比值计算,RSD为3.3%。

2.6.4 加样回收率实验 精密称取已测定含量的党参粉末6份,各2g,分别加入苍术内酯Ó的对照品适量,按2.5项下方法操作制得样品溶液。测定

Fig1 ThelinearrelationshipbetweentheinputquantityandthepeakareasofatractylenoideÓ

取0.2mg/ml的党参炔苷对照品溶液,依次稀释为100Lg/m,l60Lg/m,l15Lg/m,l7.5Lg/m,l4Lg/m,l0.5Lg/ml的对照品溶液,进样20L,l结果见表3。以峰面积值(Y)对进样量(X)进行回归,得回归方程为Y=999.09X+59.065,相关系数为r=0.9999。

表3 党参炔苷对照品线性关系考察结果Tab3

Studyonthelinearrelationshipofreferenceofsubstanceoflobetyolin序号1

2345

进样量/Lg

20.80.40.10.01

峰面积/mAU2048.14.4437.9135.086.9

并以峰面积值(Y)对进样量(X)作图,得一直线,党参炔苷在0.10-2.0Lg范围内与峰面积呈良好的线性,见图2。

图2 党参炔苷线性关系图

Fig2 Thelinearrelationshipbetweentheinputquantity

andthepeakareasoflobetyolin

计算回收率,结果见表4。

山西医科大学学报(JShanxiMedUniv)2010年8月,41(8)

表4 苍术内酯Ó加样回收率实验

Tab4 TherecoverytestofatractylenoideÓ序号123456

样品量/g2.00032.00012.00042.00001.99981.9996

苍术内酯Ó的含量/mg

0.1200

0.12000.12000.12000.12000.1200

加入量/mg0.12000.12000.12000.12000.12000.1200

测得量/mg

0.24560.24410.24270.24330.23850.2463

回收率/%1.051.051.021.030.981.05

#701#

RSD/%0.02

精密称取已测定含量的党参粉末6份,各0.5g,分别加参炔苷的对照品适量,按2.5项下方

表5 党参炔苷加样回收率实验Tab5 Therecoverytestoflobetyolin序号1

23456

样品量/g0.50000.50030.50020.49980.50040.5003

党参炔苷的含量/mg

0.1050.1050.1050.1050.1050.105

法操作制得样品溶液。测定,计算回收率,结果见表5。

加入量/mg0.1000.1000.1000.1000.1000.100

测得量/mg0.2060.2030.2020.2070.2070.205

回收率/%1.010.980.971.021.021.00

RSD/%2.1

2.7 实验结果 按照正文2.1拟定的色谱条件,分

别对16种样品进行含量测定,结果见表6。

表6 不同产地党参中苍术内酯Ó和党参炔苷含量Tab6 ThecontentsofatractylenoideÓandlobetyolin

ofRadixcodonopsiscultivatedindifferenthabits

药材采集地山西陵川党参GAP种植基地

序号 原产地123456710

不同产地

111213141516山西陵川山西农大甘肃文县内蒙山西平顺山西五台甘肃陇西湖北恩施陕西四川

山西平顺老马岭山西沁源山西壶关甘肃陇西湖北恩施陕西凤县党参炔苷含量/%0.0200.0660.0360.1050.0740.1570.0430.1720.0400.0740.0130.0200.0280.0350.0340.097苍术内酯Ó含量/%0.00600.00470.00440.00380.00330.00330.00250.0005--0.01810.01230.00300.00300.0014-3 分析与讨论

3.1 分析 现代药理学实验发现,苍术内酯Ó具有明显抗炎作用,与党参的药理活性有一定相关性,是党参的特征性成分

[13,14]

;党参中所含的党参炔苷具

[15]

有抗溃疡活性,对乙醇造成的胃黏膜损伤有很好的保护作用,与党参的补中益气的传统功效相符

。

党参炔苷具有很好的专属性和特征性。因此,本文选用苍术内酯Ó和党参炔苷作为指标性成分对党参进行含量测定和分析比较。

本研究结果表明,不同产地党参及引种到同一GAP种植基地不同产地党参苍术内酯Ó和党参炔苷的含量有显著差异。3.2 讨论

3.2.1 苍术内酯Ó含量比较 栽培在山西陵川党参GAP种植基地的10个不同原产地的党参,产于山西陵川党参苍术内酯Ó含量最高,为0.006%,四川刀党和陕西凤党没有检测到苍术内酯Ó。不同产地党参,山西沁源和山西平顺老马岭党参苍术内酯Ó含量最高,在0.01%以上,且山西产地的党参苍术内酯Ó含量均较其他产地高。

王峥涛等研究发现在不同规格、产地的党参中,

#702#

苍术内酯Ó只发现在产于山西(潞党参)的样品

山西医科大学学报(JShanxiMedUniv)2010年8月,41(8)

[6]

,党参的质量比较研究。

参考文献:

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[11] ,刘养清,郭继龙,等.山西党参药材中党参炔苷的含

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本文研究结果表明,除引种到山西陵川GAP种植基

地四川刀党、陕西凤党地的党参没有检测到苍术内酯Ó外,山西平顺潞党、湖北恩施板桥党和甘肃陇西白条党苍术内酯Ó含量引种后均增加。

3.2.2 党参炔苷含量比较 引种到山西陵川党参GAP种植基地的党参,山西五台台党与湖北恩施板桥党党参炔苷含量最高,达到了0.15%以上,其次是内蒙的口党达到0.105%。不同产地党参,陕西凤党党参炔苷含量最高,为0.097%;湖北恩施与甘肃陇西白条党含量其次,分别为0.035%和0.034%。与原产地比较,党参引种到山西陵川党参GAP基地后,产地为湖北恩施板桥党和甘肃陇西白条党的党参炔苷含量增高,分别达到0.172%和0.043%;陕西凤党党参炔苷含量变低。但是,因实验中不同产地凤党药材为多年野生药材,而采于山西陵川基地的凤党为两年生栽培品,因此,不能得出凤党不适宜引种到山西的结论,推测生长年限或许对凤党也有较大影响。

综上所述,不同产地党参及引种到同一GAP种植基地不同产地党参苍术内酯Ó和党参炔苷的含量有明显差异,不同产地的党参引种到山西种植基地后,苍术内酯Ó和党参炔苷含量有所提高。一方面说明环境条件变化对党参化学成分有显著影响,另一方面说明,山西自然环境条件适宜党参种植和引种。

就党参炔苷和苍术内酯Ó含量而言,山西产潞党、台党、湖北板桥党、甘肃纹党、白条党、内蒙口党都是品质优良的党参。

苍术内酯Ó在不同产地党参中含量普遍较低,且在陕西凤党和四川刀党中难以检测到,若用于质量控制有局限性。党参炔苷在不同产地党参中含量较高,且药理活性与传统中医用药相符合,有很好的专属性和特征性,可作为指标性成分用于不同产地

作者简介: 杨静,女1984-10生,硕士,E-mai:ldoumi0914

@yahoo.com.cn.

[收稿日期: 2010-04-09]