维普资讯 http://www.cqvip.com －１０５８・ Ｍ０ＤＥＲＮ ０ＮＣ０Ｌ０ＧＹ．Ａｕｇ．２００７．ＶＯＩ．１５，ＮＯ．８ 靶向干预多发性骨髓瘤骨髓问充质干细胞的实验研究 林如峰 ，陆化 ，刘 澎 ，王永韧 ，沈文怡 ，季 鸥 ，葛 峥 ，汪承亚 ，李建勇 Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ ｓｔｕｄｙ ｏｆｆ ｔａｒｇｅｔ ｉｎｔｅｒｖｅｎｔｉｏｎ ｏｆ ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌｓ ｉｎ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ ｍｕｌ－ ｔｉｏｌｅ ｍｙｅｌｏｍａ ＬＩＮ Ｒｕ—ｆｅｎｇ，ＬＵ Ｈｕａ，ＬＩＵ Ｐｅｎｇ，ＷＡＮＧ Ｙｏｎｇ—ｒｅｎ，ＳＨＥＮ Ｗｅｎ—ｙｉ，ＪＩ Ｏｕ，ＧＥ Ｚｈｅｎｇ，ＷＡＮＧ Ｃｈｅｎｇ—ｙａ，ＬＩ Ｊｉａｎ——ｙｏｎｇ Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆＨｅｍａｔｏｌｏｇｙ，Ｔｈｅ Ｆｉｒｓｔ Ａｉｌｆｉａｔｅｄ Ｈｏｓｐｉｔａｌ ｏｆＮａｎｉｆｎｇ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｕｎｉｖｅｒｃｉｔｙ，Ｎａｎｉｆｎｇ ２１００２９，Ｃｈｉｎａ． 【Ａｂｓｔｒａｃｔ】０ｂｊｅｃｆｉｖｅ：Ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌｓ（ＭＳＣｓ）ｐｌａｙ ａ ｃｒｕｃｉａｌ ｒｏｌｅ ｉｎ ｔｈｅ ｍｍｎｔｅｎａｎｃｅ ｏｆ ｂｏｎｅ ｍａｒｒｏｗ ｍｉ— ｃｒｏｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔ ｓｔａｂｉｌｉｚａｔｉｏｎ ｉｎ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ ｍｕｌｔｉｐｌｅ ｍｙｅｌｏｍａ（ＭＭ），ｗｈｉｃｈ ｍａｙｂｅ ａ ｎｅｗ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｔａｒｇｅｔ．Ｉｎ ｔｈｉｓ ｓｔｕｄｙ ｗｅ ａｎａｌｙｓｅｄ ｔｈｅ ａｐｏｐｔｏｓｉｓ ａｎｄ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｓ ｏｆ ｃｙｔｏｋｉｎｅｓ ＩＬ一６，ＩＬ一１ １３ ａｎｄ ＳＣＦ ｏｆ ＭＳＣｓ ｉｎ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ ＭＭ ａｆ－ ｔｅｒ ｔｈａｌｉｄｏｍｉｄｅ（Ｔｈａｉ）ａｎｄ ｄｅｘａｍｅｔｈａｓｏｎｅ（Ｄｅｘ）ｔｒｅａｔｍｅｎｔ，ａｎｄ ｅｘｐｌｏｒｅｄ ｔｈｅｓｅ ｄｒｕｇｓ ｐｏｓｓｉｂｌｅ ｎｅｗ ｍｅｃｈａｎｉｓｍ ａｎｄ ｔｈｅ ｆｅａｓｉｂｉｌｉｔｙ ｏｆ ＭＳＣｓ ａｓ ｔｈｅｒａｐｙ ｔａｒｇｅｔ．Ｍｅｔｈｏｄｓ：ＭＳＣｓ ｗｅｒｅ ｃｕｌｔｕｒｅｄ ｉｎ ｍｅｄｉｕｍ ｏｆ １６４０ ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ １０％ＦＢＳ ａｎｄ ｅｘｐｏｓｕｒｅｄ ｉｎ Ｏ￣ｍｏｌ／Ｉ ，１．０￣ｍｏｌ／Ｌ，３．０￣ｍｏｌ／Ｌ，５．０￣ｍｏｌ／Ｌ，７．０￣ｍｏｌ／Ｌ Ｔｈａｉ，０￣ｍｏｌ／Ｌ，０．１￣ｍｏｌ／Ｌ，１．０￣ｍｏｌ／Ｌ， ５．０￣ｍｏｌ／Ｌ，１０．０￣ｍｏｌ／Ｌ Ｄｅｘ，ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ，ｆｏｒ ８ｈ，ｔｈｅｎ ｃｅｌｌｓ ｗｅｒｅ ｈａｒｖｅｓｔｅｄ，ａｎｄ ＭＳＣｓ ａｐｏｐｔｏｓｉｓ ｗｅｒｅ ｄｅｔｅｃｔｅｄ ｂｙ ｉｎｖｅｒｔｅｄ ｌｉｇｈｔ ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｙ ａｎｄ ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｅ ｗｉｔｈ ａｎｎｅｘｉｎ Ｖ—ＦＩＴＣ／ＰＩ ｄｕａｌ ｓｔａｉｎｉｎｇ，ｍｅａｎｗｈｉｌｅ ＲＴ—ＰＣＲ ｗａｓ ｐｅｒｆｏｒｍｅｄ ｔｏ ｍｅａｓｕｒｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｓ ｏｆ ｃｙｔｏｋｉｎｅｓ ＩＬ一６、ＩＬ一１ ３１ ａｎｄ ＳＣＦ．Ｒｅｓｕｌｔｓ：Ｔｈａｉ．Ｄｅｘ ｉｎｄｕｃｅｄ ＭＳＣｓ ａｐｏｐ・ ｔｏｓｉｓ ｉｎ ｄｏｓｅ—ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ｆａｓｉｏｎ；ｈａｌＴ ｉｎｈｉｂｉｔｅｄ ｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｓ ｏｆ ＩＬ一６，ＩＬ一１１３ ａｎｄ ＳＣＦ（Ｐ＜０．０５），ｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ＩＬ一６ ｗａｓ ｄｅｇｒｅｓｓｉｖｅ ｇｒａｄｕａｌｌｙ ａｌｏｎｅ ｗｉｔｈ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ ｉｎｃｒｅａｓｅ．ｙｅｔ ｔｈｅ ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ Ｔｈａｉ ｏｎ ＩＬ一１ ３１ ａｎｄ ＳＣＦ ｈａｄ ｎｏ ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐ ｗｉｔｈ ｄｒｕｇ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ（Ｐ＞０．０５）；Ｄｅｘ ｉｎｈｉｂｉｔｅｄ ｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｓ ｏｆ ＩＬ一６．ＩＬ一１ ３１ ａｎｄ ＳＣＦ ｏｆ ＭＳＣｓ ａｎｄ ｗｈｉｃｈ ｃｏｒｒｅｌａｔｅｄ ｗｉｔｈ ｄｒｕｇ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ ｐｏｓｉｔｉｖｅｌｙ（Ｐ＜０．０５）．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ：Ｔｈａｉ，Ｄｅｘ ｉｎｄｕｃｅ ＭＳＣｓ ａｐｏｐｔｏｓｉｓ ａｎｄ ｉｎｈｉｂｉｔ ｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｓ ｏｆ ＩＬ一６，ＩＬ一１ ３１ ａｎｄ ＳＣＦ，ｗｈｉｃｈ ｍａｙ ｂｅ ｏｎｅ ｏｆ ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ ａｎｄ ｔａｒｇｅｔｓ ｏｒ ＭＭ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ．ｆ 【Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ】ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌｓ；ｍｕｌｔｉｐｌｅ ｍｙｅｌｏｍａ；ａｐｏｐｔｏｓｉｓ；ｃｙｔｏｋｉｎｅｓ；ｔｈａｌｉｄｏｍｉｄｅ；ｄｅｘａｍｅｔｈａｓｏｎｅ Ｍｏｄｅｒｎ Ｏｎｃｏｌｏｇｙ ２００７，１５（８）：１０５８～１０６２ 【摘要】 目的：问充质干细胞（ＭＳＣｓ）对维持多发性骨髓瘤（ＭＭ）骨髓微环境的稳定有重要作用，靶向干预 ＭＳＣｓ有望成为ＭＭ治疗新的途径，本实验通过分析沙利度胺（Ｔｈａｌｉｄｏｍｉｄｅ，ｈａｉ）和地塞米松（ｄｅｘａｍｅｔＴｈａｓｏｎｅ， Ｄｅｘ）对ＭＭ患者ＭＳＣｓ凋亡及其ＩＬ一６、ＩＬ一１１３、ＳＣＦ表达的影响，探讨上述药物可能新的作用机制和ＭＳＣｓ作 为治疗靶点的可行性。方法：含１０％ＦＢＳ的１６４０培养液培养ＭＳＣｓ，以终浓度分别为０￣ｍｏｌ／Ｌ、１．０ｔｘｍｏＬ／Ｌ、 ３．０￣ｍｏｌ／Ｌ、５．０￣ｍｏｌ／Ｌ、７．０￣ｍｏｌ／Ｌ的Ｔｈａｉ，０￣ｍｏｌ／Ｌ、０．１￣ｍｏｌ／Ｌ、１．０￣ｍｏｌ／Ｌ、５．０￣ｍｏｌ／Ｌ、１０．０ｔｘｍｏｌ／Ｌ的Ｄｅｘ 作用ＭＳＣｓ ８ｈ，倒置光学显微镜和Ａｎｎｅｘｉｎ Ｖ／ＦＩＴＣ—ＰＩ双染法荧光显微镜下观察细胞凋亡，ＲＴ—ＰＣＲ检测分 析ＩＬ一６、ＩＬ一１１３和ＳＣＦ细胞因子表达的变化。结果：Ｔｈａｉ、Ｄｅｘ均以浓度依赖方式诱导ＭＭ患者ＭＳＣｓ凋亡； Ｔｈａｌ下调ＭＳＣｓ三种细胞因子的表达（Ｐ＜０．０５），对ＩＬ一６的抑制随药物浓度增加而加重，对ＩＬ一１１３和ＳＣＦ 表达的下调与药物浓度无明显关系（Ｐ＞０．０５）；Ｄｅｘ明显抑制ＭＳＣｓ ＩＬ一６、ＩＬ一１１３、ＳＣＦ的表达（Ｐ＜０．０５），对 ３种细胞因子的抑制呈药物浓度依赖性。结论：ｈａｉＴ、Ｄｅｘ能诱导ＭＭ患者ＭＳＣｓ的凋亡，抑制其ＩＬ一６、ＩＬ一 １１３、ＳＣＦ的表达，是有效治疗ＭＭ的靶点和机制之一。 【关键词】问充质干细胞；多发性骨髓瘤；凋亡；细胞因子；沙利度胺；地塞米松 【中图分类号】Ｒ７３３．３ 【文献标识码】Ａ 【文章编号】１６７２—４９９２一（２００７）０８—１０５８—０５ 【收稿日期】 ２００６一ｌｌ一２０ 【基金项目】 江苏省卫生厅基金（Ｈ２００３１３），江苏省中医药管理局基金（１５８ｗＡ０３０５），江苏省第二批省级产业技术研究与开发资金 （２００５１１２５），南京医科大学科技发展基金（ＮＹ０１—６２） 【作者单位】 南京医科大学第一附属医院血液科，江苏南京医科大学附属儿童医院，江苏南京南京２１００２９ ２１０００８ 【作者简介】 林如峰（１９７８一），男，江西吉安人，硕士，医师，主要从事多发性骨髓瘤相关的诊疗工作。 【通讯作者】 陆化（１９５６一），女，江苏南京人，主任医师，硕士生导师，主要从事恶性血液病相关的诊疗工作。 维普资讯 http://www.cqvip.com 现代肿瘤医学２００７年８月第１５卷第８ 骨髓微环境在多发性骨髓瘤（ＭＭ）的发病、进展、耐药及 复发等生物学特性中扮演了重要角色 ｊ。除了直接作用骨 髓瘤细胞外，干预骨髓微环境是药物治疗ＭＭ的重要途径， 也是药物有效治疗ＭＭ的主要机制。实验证实骨髓间充质 干细胞（ＭＳＣｓ）与ＭＭ的发生、发展关系密切，其分泌的多种 细胞因子是骨髓瘤细胞生长增殖的必需成分 。本实验通 过沙利度胺（Ｔｈａｉ）和地塞米松（Ｄｅｘ）作用ＭＭ患者骨髓 ＭＳＣｓ后检测ＭＳＣｓ的凋亡，分析对ＭＳＣｓ分泌ＩＬ一６、ＩＬ一 １ Ｂ、ＳＣＦ有何影响，以探讨这两种药物治疗ＭＭ可能新的作 用机制和ＭＳＣｓ作为新的治疗靶点的可行性。 １材料和方法 １．１标本与试剂 ＭＳＣｓ来自住院或门诊ＭＭ患者骨髓经淋巴细胞分离液 （Ｐ＝１．０７７）分离培养，生理盐水替代药物干预的患者标本设 为对照组。沙利度胺、地塞米松购自Ｓｉｇｍａ公司，ＲＰＭＩ１６４０ 为Ｇｉｂｃｏ公司产品，胎牛血清购自ＨｙＣｌｏｎｅ公司，ＲＮＡ抽提 液Ｔｒｉｐｕｒｅ为Ｒｏｃｈｅ公司产品，Ａｎｎｅｘｉｎ Ｖ／ＦＩＴＣ—ＰＩ凋亡试剂 盒购自Ｂｅｃｔｏｎ Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ公司，ＩＬ一６、ＩＬ一１Ｂ、 ＳＣＦ、ＧＡＰＤＨ、Ｂ—ａｃｔｉｎ引物由上海“生工”公司合成。 １．２ ＭＳＣｓ的分离与培养 髂前或胸骨无菌抽取骨髓１０ｍｌ～１５ｍｌ，肝素抗凝，１× ＰＢＳ １：１稀释后缓慢加入到淋巴细胞分离液上层，８００ｇ／ｍｉｎ ×３０ｍｉｎ离心，取中间单个核细胞层置于另一离心管中，１× ＰＢＳ洗涤２次，ＲＰＭＩ １６４０培养液吹打细胞成悬液种植于含 １０％ＦＢＳ的ＲＰＭＩ １６４０培养液中，置于５％ＣＯ２，３７℃培养箱， １～２天细胞贴壁后更换培养液，以后３～４天换液一次，待细 胞数达（０．５～１）×１０。时进入下一步实验。 １．３细胞免疫表型的鉴定 收集培养的贴壁细胞用ＰＢＳ清洗２遍后制成细胞悬液 ２００ｌＡ１，加入ＣＤ３４、ＣＤ４５、ＣＤ１０５、ＣＤ９０抗体，流式细胞分析仪 检测。 １．４药物干预 ０￣ｍｏｌ／Ｌ、１．ＯｌＡｍｏｌ／Ｌ、３．ＯｌＡｍｏｌ／Ｌ、５．ＯｌＡｍｏｌ／Ｌ、７．０ｌＡｍｏｌ／Ｌ Ｔｈａｉ；０ｌＡｍｏｌ／Ｌ、０．１ｌＡｍｏｌ／Ｌ、１．０ｌＡｍｏｌ／Ｌ、５．０ ｍｏｌ／Ｌ、 １０．ＯｌＡｍｏｌ／Ｌ Ｄｅｘ作用于ＭＳＣｓ ８ｈ。 １．５细胞凋亡的检测 将Ｔｈａｉ和Ｄｅｘ作用后的ＭＳＣｓ在倒置光学显微镜下观 察细胞形态的变化；凋亡试剂染色后荧光显微镜下观察细胞 凋亡：在５００ｌＡ１缓冲液中加入５ｌＡ１Ａｎｎｅｘｉｎ Ｖ和５ＩＡ１ＰＩ，混匀备 用，将药物干预后的贴壁ＭＳＣｓ用缓冲液清洗２遍，将上述配 制好反应液滴在贴壁细胞上，避光室温孵育５ｍｉｎ，荧光显微 镜下观察。 １．６总ｌ Ａ、ｃＤＮＡ的制备 用０．２５％胰蛋白酶消化离心并分别制成细胞悬液１ｍｌ， 置于ＥＰ管离心，弃上清，Ｔｒｉｐｕｒｅ充分裂解细胞，按该试剂提 供的提取步骤抽提ＲＮＡ，紫外分光光度计测浓度并行ＲＮＡ 电泳。按Ｐｒｅｍｅｇａ公司提供操作步骤进行。总ＲＮＡ１ ｔａｇ．ｏｌｉ． ｇｏ（ｄＴ）１ｌａ１，７０℃预热５ｍｉｎ后冰水浴５ｍｉｎ，加ＡＭＶ酶１５Ｕ， ｌＯｍｍｏｌ／Ｌ ｄＮＴＰ １ ａｌ１，ＲＮＡｓｅ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ １５Ｕ，２５ｍｍｏｌ／Ｌ Ｍｇ ２ ，５×Ｂｕｆｆｅｒ ５ ｌ，加ＤＥＰＣ水至总体积２５ｌａ１，４２℃６０ｍｉｎ， ９５℃５ｍｉｎ，冰水浴５ｍｉｎ，一２Ｏ℃保存。 １．７聚合酶链反应（ＰＣＲ） 按Ｐｒｅｍｅｇａ公司提供操作步骤进行。ｅＤＮＡ２．５ ｌ， ・１０５９・ １０ｌａｍｏｌ／Ｌ上下游引物各１．５ ｌ（引物序列见表１），ｌＯｍｍｏｌ／Ｌ ｄＮＴＰ １．５ｌａ１，５Ｕ／Ｉａ１ＤＮＡ聚合酶０．５ｌａ１，２５ｍｍｏｌ／ＬＭｇ２ ３ｌａ１，１０ ×Ｂｕｆｅｒ ５ ｌ，各引物反应条件见表２。取ＰＣＲ产物５ ｌ 于０．５％ＴＢＥ电泳缓冲液，１．２％琼脂糖凝胶电泳４５ｍｉｎ，紫 外光下观察结果并灰度分析。 １．８统计学处理 实验结果用均数±标准差表示，所得数据用ＳＰＳＳ１０．０ ｆｏｒ ｗｉｎｄｏｗｓ软件分析，ｔ检验，Ｐ＜０．０５为差异有显著意义。 表１引物序列 Ｔａｂｅｌ １ Ｐｒｉｍｅｒ ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｃｙｔｏｋｉｎｅｓ Ｄｅｎａｔｕｒｅ４５ｓ ＡｎｎｅＭ４５ｓ Ｅｘｔｅｎｄ ４５ｓ ｃｙｃｌｅｓ ２结果 ２．１流式细胞术鉴定ＭＳＣｓ 培养的ＭＳＣｓ ＣＤ３４、ＣＤ４５、ＨＩＡ—ＤＲ阴性，ＣＤ１３、ＣＤ９０、 ＣＤ１０５阳性（见图１）。 ２．２对ＭＭ患者ＭＳＣｓ凋亡的影响 Ｔｈａｌ和Ｄｅｘ作用后光学显微镜下ＭＳＣｓ胞体形态改变， 失去光滑，胞膜皱缩，形成小体，部分脱离细胞形成凋亡小 体，胞内结构凝集、不清（见图２：Ａ１、Ｂ１）。Ｔｈａｉ和Ｄｅｘ作用 后荧光显微镜下ＭＳＣｓ经Ａｎｎｅｘｉｎ Ｖ—ＦＩＴＣ／ＰＩ染色后细胞膜 上可见淡绿色荧光信号，为凋亡细胞膜上磷脂酰丝氨酸由内 向外翻转与Ａｎｎｅｘｉｎ Ｖ结合引起（见图２：Ａ２、Ｂ２）。图２为 Ｔｈａｉ作用后ＭＳＣｓ形态改变（Ｂ１，Ｂ２；Ａ１，Ａ２为对照组）。随 药物浓度的增加出现上述形态改变的凋亡细胞比例增加。 ２．３ Ｔｈａｉ对ＭＭ患者ＭＳＣｓ细胞因子表达的影响 ２．３．１ Ｔｈａｉ明显抑制ＭＭ患者ＭＳＣｓ细胞因子的表达，对ＩＬ 一６的抑制随药物浓度的增加而增加，有统计学意义；Ｔｈａｌ对 ＩＬ一６的影响在初发、难治复发和ＣＲ组间无显著差异。 ２．３．２与对照组比较，Ｔｈａｉ可抑制ＩＬ一１Ｂ及ＳＣＦ的表达； １．Ｏｌａｍｏｌ／Ｌ、３．Ｏｌａｍｏｌ／Ｌ、５．Ｏｌａｍｏｌ／Ｌ、７．Ｏｌａｍｏｌ／Ｌ ４种药物浓 度的Ｔｈａｉ作用ＭＳＣｓ ８ｈ后，未观察到Ｔｈａｉ对ＩＬ一１Ｂ及ＳＣＦ 的抑制随药物浓度的增加而增加，４种浓度之间对ＩＬ一１Ｂ及 ＳＣＦ的影响无明显差别；以上观察到结果在初发、难治复发 和ＣＲ组间无显著差异。 ２．４ Ｄｅｘ抑制ＭＳＣｓ ＩＬ－６、几一１Ｂ、ＳＣＦ细胞因子的表达 维普资讯 http://www.cqvip.com Ｍ０ＤＥＲＮ ０ＮＣ０Ｉ ０ＧＹ．Ａｕｇ．２０ｏ７，ＶＯＩ．１５，ＮＯ．８ 抑制程度随药物浓度的增加而加重，Ｄｅｘ对３种细胞因 子表达的影响在初发、难治复发和ＣＲ组间无显著差异。 色 ０．６１％ 一 １．８７％ 一 ９４．３０％ ３．２０％ ０．８３％ ８９．８０％ 一 ｕ一 ｕ一 ｕ一 ●＿ ０ 宝 ‘‘ ‘‘ ８．２０％ ＿ 宝 宝 童 ９６＂￣２０％‘ ・’ １．３２％ 童 ２．０３％ ０．４７％ １．１７％ ＣＤ４５一ＦＩＴＣ ＤＲ ＦＩＴＣ ＣＤ１Ｏ５一ＦＩＴＣ 图１ ＦＣＭ分析ＭＳＣｓ免疫表型 Ｆｉｇｕｒｅ １ Ａｎａｌｙｓｅｄ ｏｆ ＭＳＣｓ ｉｍｍｕｎｏｐｈｅｎｏｔｙｐｅ ｂｙ ＦＣＭ 图２ Ｔｈａｉ作用后ＭＳＣｓ凋亡 Ｆｉｕｒｅ ２ ＭＳＣｓ ａｐｏｐｔｇｏｓｉｓ ｄｅｔｅｃｔｅｄ ａｆｔｅｒ Ｔｈａｉ ｔｒｅａｔｅｄ Ａ１、Ｂ１：光学显微镜观察细胞凋亡（×２００） Ａ２、Ｂ２：荧光显微镜观察细胞凋亡（ａｎｎｅｘｉｎ Ｖ—ＦＩＴＣ／ＰＩ双染法×２００） ｂＰ Ｍ １ ２ ３ ４ ｂＰ Ｍ １ ２ ３ ４ ５ ｂｐ Ｍ １ ２ ３ ４ ５ ５ＯＯ １００ ＧＡＰＤＨ ５００ ＩＬ一６ １ ００ Ｉｌ 一１ Ｂ ５００ ＧＡＰＤＨ ＳＣＦ Ｂ ａｃｔｉｎ １ ００ 图３ ＲＴ—ＰＣＲ分析Ｔｈａｉ对ＩＬ一６、ＩＬ一１Ｂ、ＳＣＦ的影响 Ｆｉｕｒｇｅ ３ Ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ＩＬ一６、ＩＬ一１Ｂ、ＳＣＦ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｓ ｂｙ ＲＴ—ＰＣＲ ｔｅｃｈｎｉｑｕｅ ａｆｔｅｒ Ｔｈａｉ ｔｒｅａｔｅｄ Ｍ：Ｍａｒｋｅｒ；Ｌａｎｅｌ：０￣ｍｏｌ／Ｌ；Ｌａｎｅ ２：１．Ｏｐ，ｍｏｌ／Ｌ；Ｌａｎｅ ３：３．Ｏ￣ｍｏｌ／Ｌ；Ｌａｎｅ ４：５ Ｏ￣ｍｏｌ／Ｌ：Ｌａｎｅ ５：７ ０￣ｍｏｌ／Ｌ 表３ Ｔｈａｉ作用后细胞因子ＩＬ一６、ＩＬ一１１３．ＳＣＦ表达的灰度值（ｘ± ） Ｔａｂｅｌ ３ Ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ ａｎａｌｙｓｅｄ ｒｅｓｕｌｔｓ ｏｆ ＩＬ一６、ＩＬ一１ １３．ＳＣＦ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｓ ａｆｔｅｒ Ｔｈａｉ ｔｒｅａｔｅｄ 、 、Ａ Ｐ＜０．０５，ｃｏｍｐａｒｅｄ ｗｉｔｈ ｃｏｎｔｒｏｌ 维普资讯 http://www.cqvip.com 医学２００７ 墨 箜 里鲞笠 ・１０６１・ ５００ １００ ｉ８８ ＩＢ—ａＬ一１ ｃｐｔ ５ｉｎ １００ Ｂ．ａｃｔｉｎ ＳＣＦ 图４ ＲＴ－－ＰＣＲ分析Ｄｅｘ对１１．－６、ＩＬ－－Ｉ￣、ＳＣＦ的影响 （互士ｓ） Ｆｉｇｕｒｅ ４ Ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ＩＬ－－６、ＩＬ－－Ｉ￣、ＳＣＦ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｓ ｂｙ ＲＴ—ＰＣＲ ｔｅｃｈｎｉｑｕｅ ａｆｔｅｒ Ｄｅｘ ｔｒｅａｔｅｄ Ｍ：Ｍａｒｋｅｒ；Ｌａｎｅｌ：０／ａｎｏｌ／Ｌ；Ｌａｎｅ ２：０．１￣ｍｏｌ／Ｌ；Ｌａｎｅ ３：１．０／ａｎｏｌ／Ｌ；Ｌａｎｅ ４：５．０ｔ，ｘｎｏｌ／Ｌ；Ｌａｎｅ ５：１０．０／￣ｍｏｌ／Ｌ 裹４ Ｄｅｘ作用后细胞因子ＩＬ－－６、ＩＬ－－Ｉ￣、ＳＣＦ表达的灰度值（；士ｓ） Ｔａｂｅｌ ４ Ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ ａｎａｌｙｓｅｄ ｒｅｓｕｌｔｓ ｏｆ ＩＬ一６、ＩＬ一１６、ＳＣＦ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｓ ａｆｔｅｒ Ｄｅｘ ｔｒｅａｔｅｄ ＊、＊＊、△Ｐ＜０．０５，ｃｏｍｐａｒｅｄ ｗｉｔｈ ｃｏｎｔｒｏｌ ３讨论 未见报道。我们实验发现上述２种药物可以明显抑制ＭＳＣｓ ＩＬ一１８的表达，可以认为是治疗ＭＭ的重要机制之一。 骨质损害是ＭＭ的主要临床特征，是疾病预后判断的 重要指标，且认为ＩＬ一１口是与之关系最密切的细胞因子ｌ＿１ ， ＭＭ是异常浆细胞单克隆恶性增生性疾病，目前难以治 愈。研究证实骨髓微环境在ＭＭ疾病的发生发展中有重要 作用，干扰其活性是ＭＭ治疗的主要途径之一ｌ＿４ 。骨髓微 环境的组成极其丰富复杂，其中ＭＳＣｓ为其主要组成成分， 是基质细胞的前体细胞，是骨髓微环境活性的主要缔造者和 维持者，对ＭＭ细胞的存活、增殖、耐药、抗凋亡等生物学特 性有重要的支持作用＿２］。本实验通过Ｔｈａｌ和Ｄｅｘ作用骨 髓ＭＳＣｓ后检测细胞凋亡和细胞因子表达的改变，分析 药物治疗ＭＭ时对ＭＳＣｓ的影响，探讨ＭＭ治疗新的 作用靶点和可能机制。Ｔｈａｉ代表了ＭＭ靶位治疗的第一 对ＩＬ一１Ｂ的抑制作用可能是ＭＭ化疗后能改善骨质破坏的 原因之一。 有研究发现ＭＳＣｓ在一定的因素刺激后能形成肿瘤，可 能是肿瘤干细胞的一种来源之一［１ ］。目前虽无证据表明 ＭＳＣｓ是ＭＭ患者的肿瘤干细胞，但鉴于ＭＳＣｓ在ＭＭ中的 重要地位，可以认为至少部分具有肿瘤干细胞的特性。我们 实验中观察到了Ｉｂｅｘ和Ｔｈａｉ可以诱导ＭＳＣｓ凋亡，抑制其 细胞因子的分泌，证实ＭＳＣｓ可以作为ＭＭ靶向治疗的靶 类药物，可抑制血管生成，下调细胞因子水平，诱导ＭＭ细 胞凋亡［５，６３。我们实验用一浓度梯度的Ｔｈａｉ作用ＭＳＣｓ后 检测细胞因子的表达改变，发现Ｔ｝ｌａｌ明显下调ＭＳＣｓ细胞 因子ＩＬ一６、ＩＬ一１６、ＳＣＦ的表达，证实Ｔｈａｌ除上述作用机制 外，可以在ＭＳＣｓ水平干扰骨髓微环境，是Ｔｈａｉ有效抗ＭＭ 点，通过对具有肿瘤干细胞特性靶点的定向治疗将破 坏肿瘤细胞无限增殖的能力，有望进一步改善ＭＭ的预 后。 Ｔｈａｉ、Ｄｅｘ是目前用于治疗ＭＭ较普遍的药物，代表了 不同的作用机制，本实验证实这２种药物均能通过对ＭＳＣｓ 诱导凋亡和抑制细胞因子的分泌发挥抗ＭＭ作用，在难治／ 复发和ＣＲ患者都观察到了这种效应。提示在难治／复发患 的原因之一。对ＭＳＣｓ的诱导凋亡作用进一步说明其作用 靶点的多样性，为临床进行联合化疗减少耐药提供依据。 Ｄｅｘ是ＭＭ治疗最常用的药物之一，作用机制未完全明 了。既往研究＿７］主要集中在ＭＭ细胞本身，对Ｄｅｘ是否能 以及如何通过骨髓微环境诱导ＭＭ细胞凋亡尚不清楚。我 者中尽管存在肿瘤细胞的耐药，这些药物也能通过转移作用 靶点起到一定效果；在ＣＲ或移植后患者中上述药物通过对 ＭＳＣｓ的抑制作用能进一步清除残留病灶，减少疾病复发，不 会因为低肿瘤负荷或ＭＭ细胞处于Ｇｏ而失去作用目标， 们用不同浓度Ｄｅｘ干预ＭＳＣＳ后发现能诱导其凋亡，凋亡细 胞比例随药物浓度增加，同时可显著抑制ＭＳＣｓ １Ｌ一６、１Ｌ一 １６、ＳＣＦ的表达。可见，Ｄｅｘ除了能直接作用ＭＭ细胞外，还 能通过影响ＭＳＣｓ减少细胞黏附，降低细胞因子的支持作 用，是Ｄｅｘ抗ＭＭ的另一机制。由于ＩＬ一６可以抗Ｄｅｘ的 为ＣＲ期患者进行巩固维持治疗提供理论依据。临床 上Ｔｈａｉ和Ｄｅｘ联合用药能明显提高疗效，两者联合作 用后对ＭＳＣｓ的干预效果以及是否对临床更好疗效有帮 助需更多研究。 【参考文献】 Ｅ１］Ｖｉｔｏ ＭＬ．Ａ ｒｅｖｉｅｗ ｏｆ ｔｈｅ ｃｙｔｏｋｉｎｅ ｎｅｔｗｏｒｋ ｉｎ ｍｕｌｔｉｐｌｅ ｍｙｅｌｏ— ｎ Ｊ］．Ｃａｎｃｅｒ，２００３，９７（１０）：２４４０￣２４５２． ［２］Ｗａｌｌａｃｅ Ｓ Ｒ，Ｏｋｅｎ Ｍ Ｍ，Ｌｕｎｅｔｔａ Ｋ Ｌ，ｅｔ口 ．Ａｂｎｏｒｍａｌｉｔｉｅｓ ｏｆ ｂｏｎｅ ｍａｒｒｏｗ ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ ｃｅｌｌｓ ｉｎ ｍｕｌｔｉｐｌｅ ｍｙｅｌｏｍａ ｐａ－ 诱导凋亡作用，对ＭＳＣｓ细胞因子分泌的抑制作用是否能减 轻ＩＬ一６的抗凋亡和减少耐药值得进一步研究。 ＩＬ一１口可刺激ＭＳＣｓ分泌ＩＬ一６和多种黏附分子，促进 细胞转移、增殖、耐药和抗凋亡，并有独特的破骨细胞作用， ９５ 以上的ＭＭ细胞可检测到此因子表达，认为是浆细胞 病进展的重要指标［８ ］。化疗药物对ＩＬ一１口有何影响目前 ｔｉｅｎｔｓ［Ｊ］．Ｃａｎｃｅｒ，２００１，９１（７）：１２１９￣１２３０． 维普资讯 http://www.cqvip.com ・１Ｏ６２・ ］ ＭＯＤＥＲＮ ＯＮＣＯＬＯＧＹ．Ａｕｇ．２００７，ＶＯＩ．１５，Ｎ０ ］ ］ ］ ］ 沈文怡，陆化，唐宇宏，等．多发性骨髓瘤骨髓间充质干细胞多 种细胞因子的异常表达［Ｊ］．南京医科大学学报（自然科学 版），２００５，２５（４）：２３９～２４２． Ｈｉｄｅｓｈｉｍａ Ｔ，Ｐｏｄａｒ Ｋ，Ｃｈａｕｈａｎ Ｄ，ｅｔ ａ１．Ｃｙｔｏｋｉｎｅｓ ａｎｄ ｓｉｇｎａｌ ｆ ８］Ｌｕｓｔ ＪＡ，Ｄｏｖｏｖａｎ ＫＡ．Ｔｈｅ ｒｏｌｅ ｏｆｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ一１ ｂｅｔａ ｉｎ ｔｈｅ ｐａｔｈ－ ｏｇｅｎｅｓｉｓ ｏｆ ｍｕｌｉｔｐｌｅ ｍｙｅｌｏｍａ［Ｊ］．Ｈｅｍａｔｏｌ Ｏｎｃｏｌ Ｃｌｉｎ Ｎｏｒｔｈ Ａｍ， １９９９，１３（９）：１１１７～１１２５． ［９］Ｄｏｖｏｖａｎ ＫＡ，Ｌａｃｙ ＭＱ，Ｇｅｒｔｚ ＭＡ，ｅｔ ａ１．ＩＬ—ｌｂｅｔａ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｉｎ ＩｇＭ ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ ｇａｍｍｏｐａｔｈｙ ａｎｄ ｉｔｓ ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐ ｔｏ ｍｕｌｔｉｐｌｅ ｍｙｅｌｏ－ ｔｒａｎｓｄｕｃｔｉｏｎ［Ｊ］．Ｂｅｓｔ Ｐｒａｃｔｉｃｅ＆Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｃｌｉｎ Ｈａｅｍａｔｏｌｏｇｙ， ２００５．１８（４）：５０９～５２４． Ｂ￣ｃｅｄｏｒｏＭ．Ｂ１ａｄｅ Ｊ，ＡｔｔｌＭ，ｅｔａ ａ１．Ｔｈｅｆｕｔｕｒｅ ｒｏｌｅ ｏｆｔｈａｌｉｄｏｍｉｄｅ ｍｓ［Ｊ］．Ｌｅｕｋｅｍｉａ，２００２，１６（３）：３８２～３８５． ［１０］Ｃｏｓｔｅｓ Ｖ，Ｐｏｒｔｉｅｒ Ｍ，Ｌｕ ＺＹ，ｅｔ ａ１．Ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ一１ ｉｎ ｍｕｌｔｉｐｌｅ ｍｙ。 ｅｌｏｍａ：ｐｒｏｄｕｃｅｒ ｃｅｌｌｓ ａｎｄ ｔｈｅｉｒ ｒｏｌｅ ｉｎ ｔｈｅ ｃｏｎｔｒｏｌ ｏｆ ＩＬ一６ ｐｒｏ－ ｉｎ ｍｕｌｉｔｐｌｅ ｍｙｅｌｏｍａ［Ｊ］．Ａｃｔａ Ｈａｅｍａｔｏｌ，２００５，１１４ Ｓｕｐｐｌ １：１８～ ２２． ｄｕｃｔｉｏｎ［Ｊ］．Ｂｒ ＪＨａｅｍａｔｏｌ，１９９８，１０３（４）：１１５２～１１６０． ［１１］Ｘｕ Ｗ，Ｑｉｎ Ｈ，Ｚｈｕ Ｗ，ｅｔａ ａ１．Ａｎｏｖｅｌ ｔｕｍｏｒ ｃｅｌｌ ｌｉｎｅ ｃｌｏｎｅｄ ｆｒｏｍ ｍｕｔａｔｅｄ ｈｕｍａｎ ｅｍｃｒｙｏｎｉｃ ｂｏｎｅ ｎ＇ｌａｌ３ｍｗ ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌｓ Ｂａｒｌｏｇｉｅ Ｂ。Ｔｒｉｃｏｔ Ｇ，Ａｎａｉｓｓｉｅ Ｅ，ｅｔ ａ１．Ｔｈａｌｉｄｏｍｉｄｅ ａｎｄ ｈｅｍａｔｏｐｏｉ— ｅｒｉｃ ｃｅｌｌｔｒａｎｓｐｌｎｔａａｔｉｏｎ ｆｏｒ ｍｕ￣ｐｌｅ ｍｙｅｌｏｍａ［Ｊ］．Ｎ Ｅａｒｌ Ｊ Ｍｅｄ， ２ＯＯ６。３５４（１Ｏ）：１０２１～１０３０． Ｙａｎ Ｈ。Ｆｒｏｓｔ Ｐ。Ｓｈｉ Ｙ，ｅｔ ａ１．Ｍｅｃｈａｎｉｓｍ ｂｙ ｗｈｉｃｈ ｍａｍｍａｌｉｎ ｔａａｒ－ ｇｅｔ ｏｆ ｒａｐａｍｙｃｉｎ ｉｎｈｉｂｉｔａｒｓ ｓｅｎｓｉｔｉｚｅ ｍｕｌｔｉｐｌｅ ｍｙｅｌｏｍａ ｃｅｌｌｓ ｔｏ ｄｅｘａ－ ［Ｊ］．Ｏｎｃｏｌ Ｒｅｐ，２００４，１２（３）：５０１－５０８． ［１２］Ｈａｎ Ｃ，Ｚｈａｎｇ Ｘ，Ｘｕ Ｗ，ｅｔ ａ１．Ｃｌｏｎｉｎｇ ｏｆ ｔｈｅ ｎｕｃｌｅｏｓｔｅｍｉｎ ｇｅｎｅ ｎｄ ｉａｔｓ ｆｕｎｃｔｉｏｎ ｉｎ ｔｒａｎｓｆｏｒｍｉｎｇ ｈｕｍａｎ ｅｍｂ￣ｏｍｃ ｂｏｎｅⅡ 删１ｗ ｍｅｔｈａｓｏｎｅ—ｉｎｄｕｃｅｄ ａｐｏｐｔｏｓｉｓ［Ｊ］．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ，２００６，６６（４）： ２３０５～２３ｌ３． ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌｓ ｉｎｔｏ Ｆ６ ｔｕｍｏｒ ｃｅｌｌｓ［Ｊ］．Ｉｎｔ Ｊ Ｍｏｌ Ｍｅｄ， ２００５．１６（２）：２０５～２１３． 外阴鳞癌动物模型的建立及ＭＤＭ２表达的研究 欧阳玲，张淑兰，付凌捷，王欣，陈荣莉 Ｅｓｔａｂｌｉｓｈｍｅｎｔ ｏｆ ａｎ ａｎｉｍａｌ ｍｏｄｅｌ ｏｆ ｖｕｌｖａｒ ｓｑｕａｍｏｕｓ ｃｅｌｌ ｃａｒｃｉｎｏｍａｓ ａｎｄ ｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓ－ ｓｉｏｎ ｏｆ ＭＤＭ２ ＯＵＹＡＮＧ Ｌｉｎｇ，ＺＨＡＮＧ Ｓｈｕ—ｌａｎ，ＦＵ Ｌｉｎｇ—ｊｉｅ，ＷＡＮＧ Ｘｉｎ，ＣＨＥＮ Ｒｏｎｇ—ｌｉ Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆＯｂｓｔｅｔｒｉｃ ａｎｄ Ｇｙｎｅｃｏｌｏｇｙ，Ｓｅｃｏｎｄ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｃｏｌｌｅｇｅ，Ｃｈｉｎａ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｓｈｅｎｙａｎｇ １１０００４，Ｃｈｉａ．ｎ 【Ａｂｓｔｒａｃｔ】０ｂｊｅｃ￣ｖｅ：Ｔｏ ｓｔｕｄｙ ｔｈｅ ｗａｙ ｏｆ ｅｓｔａｂｌｉｓｈｉｎｇ ａｎ ａｎｉｍａｌ ｍｏｄｅｌ ｆ０ｒ ｔｈｅ ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ｏｆ ｖｕｌｖａｒ ｓｑｕａｍｏｕｓ ｃｅｌｌ ｃａｒｃｉｎｏｍａｓ ａｎｄ ａｎａｌｙｚｅ ｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ＭＤＭ２ ｍＲＮＡ．Ｍｅｔｈｏｄｓ：Ｅｓｔｒａｄｉｏｌ ｂｅｎｚｏａｔｅ ｈｙｐｏｄｅｒｍｉｃａｌｌｙ ｗａｓ ｉｎｊｅｃ． ｔｅｄ ｔｏ ｔｈｅ ａｂｄｏｍｅｎ ｏｆ ３２ １２９／Ｊ ｍｉｃｅ ｏｎ ｔｈｅ ｄｏｓｅ ｏｆ １５ｍＳ／ｋｇ。ｎｏ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｔｏ ｃｏｎｔｒｏｌ ｇｒｏｕｐ．Ｓａｍｐｌｅｓ ｗｅｒｅ ｏｂｓｅｒｖｅｄ ｕｎｄｅｒ ｔｈｅ ｌｉｇｈｔ ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｅ．Ｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ＭＤＭ２ ｔｕＲＮＡ ｗａｓ ｄｅｔｅｃｔｅｄ ｗｉｔｌ１ ＲＴ—ＰＣＲ．Ｒｅｓｕｌｔｓ：ＶＩＮ ｏｆ ｉｃｅ ｗａｍｓ ｆｏｕｎｄ ｉｎ ｓｈｃｅ ｔｈａｔ ｓｔａｉｎｅｄ ｂｙ ＨＥ ｍｅｔｈｏｄ，ｔｈｅ ｉｎｃｉｄｅｎｃｅ ｏｆ ＶＩＮ ｗａｓ ６５．５％，ｔｈｅｒｅ ｗｅｒｅ ５ ｃａｓｅｓ ｏｆ ＶＩＮ１５ ｃａｓｅｓ ｏｆ ，ＶＩＮ２，ａｎｄ ９ ｃａｓｅｓ ｏｆ ＶＩＮ３．Ｔｈｅ ｉｎｃｉｄｅｎｃｅ ｏｆ ＶＳＣＣ Ｗａｓ ３４．５％．ＭＤＭ２ ｍＲＮＡ ｗａｓ ｈｉｈｌｇｙ ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ ｉｎ ｔｈｅ ＶＩＮｌ２，ＶＩＮ３ ａｎｄ ＶＳＣＣ ｔｉｓｓｕｅ，ｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ＭＤＭ２ ｈａｄ ｎｏｔ ｂｅｅｎ ｆｏｕｎｄ ｉｎ ｔｈｅ ｖｕｌｖａｒ ｅｐｉｈｅｌｉｔｕｍ ｏｆ ｔｈｅ ｃｏｍｐａｒｉ． 一ｓｏｎ ｉｃｅ，ｔｍｈｅｒｅ ｗａｓ ｎｏ ｓｔａｔｉｓｔｉｃａｌ ｓｉｇｎｉｉｆｃａｎｃｅ ｂｅｔｗｅｅｎ ｔｈｅ ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ ｇｒｏｕｐ ｎｄ ａＶＩＮｓ ｒｏｕｐ（Ｐ＞０．０５）．ｔｇｈｅｒｅ ｗａｓ ｓｔａｔｉｓｔｉｃａｌ ｓｉｎｉｇｉｆｃａｎｃｅ ｂｅｔｗｅｅｎ ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ ｇｒｏｕｐ ａｎｄ ＶＳＣＣ ｇｒｏｕｐ ｏｒ ｂｅｔｗｅｅｎ ＶＩＮｓ ｇｒｏｕｐ ａｎｄ ＶＳＣＣ ｇｒｏｕｐ（Ｐ＜ ０．０５）．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ：Ｆｏｒｍａｔｉｏｎ ａ ＶＩＮｓ／ＶＳＣＣ ｍｏｄｅｌ ｏｆ ｍｉｃｅ ｓｕｃｃｅｓｓｆｕｌｌｙ ｂｙ ｕｓｉｎｇ ａｒｔｉｉｆｃｉｌ ｅｓｔｒｏｇｅｎ．Ｔａｈｅ ｃｈａｎｇｅ ｏｆ ＭＤＭ２ ｉｎ ＶＳＣＣ ｏｆｍｉｃｅ ｉｓ ｔｈｅ ｓａｎｌｅ ａｓ ｗｈｉｃｈ ｉｎ ｈｕｍａｎ ｔｉｓｓｕｅ．ｓｏ ｗｅ ｃａｎ ｕｓｅ ＭＤＭ２ ａｓ ａ ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ ｍａｒｋｅｒ ｏｆ ＶＳＣＣ． 【Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ】ＶＩＮ；ＶＳＣＣ ａｎｉｍａｌ ｍｏｄｅｌ；ＭＤＭ２；１２９／Ｊ ｍｉｃｅ Ｍｏｄｅｒｎ Ｏｎｃｏｌｏｇｙ ２００７，１５（８）：１０６２～１０６５ 【摘要】 目的：探讨外阴鳞癌动物模型建立的方法，研究在鼠外阴癌变发生、演进过程中ＭＤＭ２的表达变 化。方法：采用苯甲酸雌二醇注入３２只１２９／Ｊ型鼠腹部皮下，８只为对照组，观测肿瘤的体积，取材做病理诊 断。采用ＲＴ—ＰＣＲ技术检测ＭＤＭ２基因的ｍＲＮＡ表达。结果：外阴上皮内瘤变（ＶＩＮ）发生率为６５．５％ （１９／２９），其中ＶＩＮｌ、ＶＩＮ２各５例，ＶＩＮ３ ９例；外阴鳞状细胞癌（ＶＳＣＣ）发生率为３４．５％。ＶＩＮ㈠、ＶＩＮ３、ＶＳＣＣ 和对照组中，ＭＤＭ２基因的ｍＲＮＡ的相对表达量分别为０．３４±０．１ｌ、０．４２±０．２０、１．８４±０．３２和０．３０±０．０１： ＶＳＣＣ分别与ＶＩＮ。 ：、ＶＩＮ３和对照组相比，差异均有统计学意义（Ｐ＜０．０５）。结论：１２９／Ｊ型鼠可为外阴病变 【收稿１３期】 ２００６一ｌｌ一２９ ２００４２０６７）；辽宁省教育厅攻关计划项目（项目编号：２００４Ｄ１７８） 【基金项目】 辽宁省自然科学基金资助项目（项目编号：【作者单位】 中国医科大学附属二院妇产科，辽宁沈阳１１０００４ 【作者简介】 欧阳玲（１９６４一），女，湖南人，副教授，博士，硕士生导师，主要从事外阴及宫颈病变的研究。