甲酸的固定作用

中国医学工程

China Medical Engineering

Vol.20 No.8 Aug，2012

临床研究・ ・

甲酸的固定作用探析

马少卿，张渭波，史承雯，王 敏

（咸阳市中心医院 病理科，陕西 咸阳 712000）

摘要:冰醋酸作为病理标本的常规固定液，在国内外各个实验室普遍应用。但是冰醋酸强烈的刺激气味对病理科工作环境

和工作人员有着巨大影响。而刺激性远小于冰醋酸的甲酸同样作为有机酸，却未被当作固定剂得以应用。另外甲酸是甲醛的氧化形式，和甲醛一样带有醛基。因此我科应用3%的甲酸对标本进行固定实验，效果优于冰醋酸，污染小于冰醋酸，完全可以替代冰醋酸进行标本固定。 关键词:甲酸；病理标本；固定 中图分类号:R 362

一直以来，甲醛作为病理科最常用的固定试剂在病理标本固定中发挥着重要作用，而冰醋酸也被作为病理科常用的固定试剂之一，在病理标本固定中也比较常用，但是作为甲醛的氧化形式，冰醋酸的同族——甲酸却没有被作为固定试剂写入教材，常规应用于工作，且甲酸相对冰醋酸，刺激气味小、分子量小、酸性较强等优点。因此，笔者经过一系列实验证明甲酸的固定作用是可靠的。

1 材料与方法1.1标本来源

随机对2009年8月-2012年5月病理活检标本400例进行实验。1.2试剂与方法

由于冰醋酸和甲酸固定对组织都有明显的膨胀作用，一般很少单独使用，因此我们首先使用甲酸替代冰醋酸配制混合固定液进行实验。且甲酸的酸性强于冰醋酸，因此我们使用浓度较低的甲酸代替冰醋酸配制混合固定液进行实验。1.2.1试剂

（1）在Carnoy固定液中使用甲酸代替冰醋酸进行实验，应用配方:甲酸6mL、氯仿30mL、无水乙醇60mL代替原配方:冰醋酸10mL、氯仿30mL、无水乙醇60mL作为固定液；（2）各种浓度乙醇、二甲苯等日常工作试剂；（3）苏木素染液；（4）免疫组织化学试剂（均购自福州迈新生物技术开发有限公司）。1.2.2方法

随机对病理标本100例，使用本固定液充分固定3h，时间不宜过长，固定时间过长会对标本有影响，但不像含冰醋酸的固定液那样要求温度必须高于15℃，甲酸无此要求。然后经取材、除酸后按常规进行操作。依照程序进行梯度乙醇脱水、透明、浸蜡、包埋，以4um进行常规切片，烤片后进行HE染色和免疫组化染色。

结果:HE染色细胞结构完整，染色效果理想，细胞区分明显，核浆对比清楚；免疫组化染色结果明显、阴阳对比清楚，与使用冰醋酸的混合固定液没有区别。1.2.3试剂

（1）在Bouin's中使用甲酸代替冰醋酸和苦味酸进行实验。应用配方:甲酸6mL、甲醛10mL加水至100mL代替原配方:饱和苦味酸:甲醛水溶液:冰醋酸=15:5:1；（2）各种浓度乙醇、二甲苯等日常工作试剂；（3）苏木素染液；（4）免疫组织化学试剂（均购自福州迈新生物技术开发有限公司）。1.2.4方法

随机对病理标本200例，使用本固定液固定液充分固定6h，时间不宜过长，固定时间过长会对标本有影响。然后按

收稿日期:2012-07-10

文献标识码:B

照经取材、除酸后按常规进行操作。依照程序进行梯度乙醇脱水、透明、浸蜡、包埋，以4μm进行常规切片，烤片后进行HE染色和免疫组化染色。结果:HE染色细胞结构完整，染色效果理想，细胞区分明显，核浆对比清楚；免疫组化染色结果明显、阴阳对比清楚，效果更佳。

1.2.5由于在混合固定液中，几种成分都具有固定作用，因此我们单独使用甲酸对组织进行固定，确定甲酸的固定作用。

试剂:（1） 3%甲酸水溶液:量取甲酸3mL，加水至100mL；（2） 各种浓度乙醇、二甲苯等；（3） 苏木素染液；（4） 免疫组织化学试剂（均购自福州迈新生物技术开发有限公司）。1.2.6方法

随机对病理标本100例，使用3%甲酸水溶液充分固定6h，时间亦不宜过长。然后按照经取材、除酸后按常规进行操作。依照程序进行梯度乙醇脱水、透明、浸蜡、包埋，以4um进行常规切片，烤片后进行HE染色和免疫组化染色。 结果:HE染色细胞结构完整，染色效果理想，细胞区分明显，核浆对比清楚；免疫组化染色结果明显、阴阳对比清楚，明显优于冰醋酸固定的标本。

2 讨论

固定的作用，是为保持细胞与生活时的状态相似，防止组织自溶与腐败，并保持细胞内的特殊成分与生活状态时相仿，经过固定后，使细胞内的一些成分可沉淀或凝固，定位于原有部位，有利于其后物质的确切定位，对于不同的物质选择不同的固定剂和固定方法，以便于区分不同组织成分。组织细胞内不同物质经固定后产生不同的折光率，对染料产生不同的亲和力，经染色后容易区分；且有利于切片，固定剂有硬化作用，使组织硬度增加，便于切片，使组织的半液体状态变为半固体状态，有固化作用，使其可以接受随后的组织处理过程，但是固定一般都会造成不同程度的物质损失，不同的固定剂和固定方法会引起不同程度的细胞内蛋白质、粘多糖、脂类、核酸和低分子物质的损失，且会引起组织皱缩或膨胀，因此应根据研究目的的不同选择合适的固定剂和固定方法，以使所研究的物质损失达到最小。提高固定液的固定速度，即提高固定液的穿透力显得尤为重要，甲醛作为最常规的固定液，最主要的原因之一就是分子量小，穿透力强，冰醋酸也由于其分子量小，穿透力强而作为固定液常规使用，而甲酸的刺激性远小于冰醋酸，且分子量小于冰醋酸，其穿透力更强，相对冰醋酸而言，酸性更强，因此笔者选择甲酸进行实验[1-3]。

固定一般通过2条途径实现，即沉淀固定和交联固定，

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第20卷第8期 2012年8月

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Vol.20 No.8 Aug，2012

沉淀固定的原理就是通过沉淀蛋白质达到固定目的；交联固定的原理是通过与氨基酸形成交联达到固定目的。在一般操作常规中，冰醋酸、苦味酸、乙醇、丙酮等都被当作沉淀固定剂应用，甲醛、戊二醛等都都被当作交联固定剂应用。冰醋酸的固定原理就是利用其酸性沉淀蛋白质，抑制细菌和酶的活性，防止自溶，且分子量小，穿透力强，但不能保存糖，也不能固定脂肪和类脂，固定高尔基复合体不能用高浓度醋酸，可以较好地保存染色体结构，可以把未分裂细胞核的染色质沉淀为块状体，清楚显示细胞核，组织膨胀明显，但是经过乙醇脱水后，形态较好。而甲酸既含有酸根，又有醛基，因此既可以利用酸来沉淀蛋白质，又可通过醛基与氨基酸进行交联，但是更多表现为利用酸性沉淀蛋白质。同冰醋酸一样，对脂肪和类脂的固定不理想，高尔基复合体、染色体效果较好，糖的保存优于冰醋酸，组织在固定时膨胀，脱水后形态恢复。由于资料中对于甲酸的固定作用未加以提及，因

此各个病理实验室现在也没有过多应用，而笔者在工作中，考虑冰醋酸的刺激性远远大于甲酸，对实验室和周围环境的扩散影响小于冰醋酸，因此在实验中采用甲酸作为固定剂，经实验证明:甲酸作为固定剂在实验室是可靠的。

在浓度的选择上，甲醛作为固定液浓度为4%，笔者结合甲酸的pka值为3.75，而冰醋酸的pka值为4.75，甲酸的酸性强于冰醋酸，作为固定液的冰醋酸浓度为5%，因此选择3%的甲酸作为固定剂，在应用中证明是成功的。参 考 文 献

[1] 刘盛.病理学技术[M].第一版.北京:人民卫生出版社,2008:78.[2] 颜朝国.有机化学[M].第一版.北京:化学工业出版社,2009:99.[3] 张曼夫.生物化学[M].第一版.北京:中国农业大学出版

社,2002:86.

（高娟 编辑 ）

（上接第132页）

和ET在窒息程度越重的状态下，越呈明显的升高，AVP在机体有缺氧情况时大量进入血液，造成血管收缩，进而对组织器官造成缺氧性损害。肾脏在人体的血流量呈较高水平，为心排血量的20%-25%，显著高于其它脏器血量，故对缺氧缺血有高度敏感性。肾血流量在新生儿期较少，在1周内为心排出量的8%-12%，因血液在窒息后重新分布，显著减少了肾血流量，是造成肾脏损害的主要因素。故肾脏功能在窒息发生时受的影响较大，且通常先发生脑损伤。与轻度窒息儿比较，正常新生儿尿素氮、血肌酐较低[3]。统计学分析差异有统计学意义。机体白蛋白在缺氧时代谢显著增加，并降低了肾小球滤过率，使肌肉组织发生损伤，加大了肌酐、肌红蛋白的释放，明显升高了尿毒氮、血肌酐的水平。 多巴胺属人类内源性儿茶酚胺，是去甲肾上腺素生物合成的基础，在新生儿重度窒息且有肾功能损害中采用多巴胺的治疗原理为:（1）使血管中的多巴胺受体兴奋，对肠系膜血管产生扩张作用，使肠壁微循环明显改善，对肠功能的恢复有显著促进作用；（2）使肾脏的多巴胺受体激活，对肾血管有明显舒张作用，增加肾小球滤过率及肾血流量，明显改善肾功能，使尿量显著增加[4]；（3）对心脏β1受体和多巴胺受体有明显兴奋作用，增加了心输出量与心悸心缩力，当血压>6.67kPa，心率维持在120次/min以上时，各脏器的血流量可得到保障，促进了各个脏器功能的恢复。另外多巴胺对胃肠道正常灌注未构成影响，使胃肠道血供改

善，对内源性胃肠细胞有明显改善作用，使胃黏膜防御功能增强，加速了胃损害的恢复。

本次研究中，对尿毒氮、血肌酐在入院第3-7天复查，均呈正常恢复，提示肾小球滤过功能发生的障碍属一过性，在纠正缺氧情况后可立即呈正常恢复，肾脏功能损害在窒息后多无明显早期临床症状，易被忽视。故需加强窒息患儿肾功能和尿量的监测，以及时发现并处理异常，以便宜对肾功能损害及时检出，争取得到有效的治疗。多巴胺具有较短的半衰期，起效迅速，早期可持续滴注。故重度窒息患儿早期采用小剂量多巴胺治疗，可显著降低肾、胃肠等脏器损害，缩短病程、使病情得到最大限度的缓解，提高疾病治愈率，使家庭的经济负担减轻，值得在临床推广应用。参 考 文 献

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[4] 赵祥文,樊寻梅,魏克伦,等.儿科急诊医学[M].第2版.北京:

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（高娟 编辑 ）

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（上接第133页）

4 讨论

考虑到原料利用率和生产成本因素，建议生产上采用粉碎刺五加叶为细粒（通过80目筛）、提取时间为3h，总黄酮提取可达到25.13 mg/g。参 考 文 献

[1] Qiming Liang,Xiaofeng Yu,Shaochun Qu,et al.Acanthopanax

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（高娟 编辑 ）

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