紫外分光光度法
ATP 含量检测试剂盒说明书
注意：本产品试剂有所变动，请注意并严格按照该说明书操作。 货号：UPLC-MS-4576 规格：50T/48S
产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系工作人员。
试剂名称 提取液 试剂一 试剂二 试剂三 试剂四 试剂五 试剂六 标准品 溶液的配制：
1. 2 .3 .4 .5 .6 .
规格 液体 60 mL×1 瓶 液体 50 mL×1 瓶 粉剂×1 瓶 液体 8 mL×1 瓶 粉剂×3 支 粉剂×1 瓶 粉剂×3 支 粉剂×1 支 保存条件 2-8℃保存 2-8℃保存 2-8℃保存 2-8℃保存 -20℃保存 2-8℃保存 -20℃保存 -20℃保存 提取液低温条件下，可能有结晶析出，放于 60℃水浴加热溶解即可，不影响使用。 试剂二：临用前加入 7 mL 蒸馏水充分溶解，可加热促进溶解；
试剂四：临用前取 1 支加入 0.2mL 蒸馏水溶解，用不完的试剂-20℃分装保存 2 周，避免反复冻融； 试剂五：临用前加入 3.2 mL 蒸馏水充分溶解，用不完的试剂-20℃分装保存 4 周，避免反复冻融； 试剂六：临用前取 1 支加入 0.25 mL 蒸馏水备用，用不完的试剂-20℃分装保存 2 周，避免反复冻融； 标准品：5 mg ATP。临用前加入 0.826 mL 蒸馏水配成 10 μmol/mL 的 ATP 标准溶液，用不完的试剂-20℃ 工作液的配制：临用前请按试剂二(mL)：试剂三(mL)：试剂四(mL)：试剂五(mL)：试剂六(mL)=1：1：0.1：0.4：
分装保存 4 周，避免反复冻融；
7 .
0.1 的比例配制（2.6mL，约 10T 的量），现配现用。 产品说明：
ATP 广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，是生物能量通货，能荷是描述细胞能量代谢状态的主要参数。测定 ATP 含量并且计算能荷，能够反映能量代谢状态。
HK 催化葡萄糖和 ATP 合成 6-磷酸葡萄糖，6-磷酸葡萄糖脱氢酶进一步催化 6-磷酸葡萄糖脱氢生成 NADPH， NADPH 在 340nm 有特征吸收峰，NADPH 和 ATP 含量成正比，以此反应 ATP 含量。
Glucose
ATP
HK ADP
Glucose 6-Phosphate
Glucose 6-Phosphate
Dehydrogenase (G-6-P-DH)
NADP+
NADPH
Gluconate-6-Phosphate
技术指标：
最低检出限：0.0023 μmol/mL 线性范围：0.0390625-2.5 μmol/mL
本产品仅供科学研究使用！请勿用于临床、诊断、食品、化妆品检测等用途！-上海液质检测技术有限公司
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注意：实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。 需自备的仪器和用品：
紫外分光光度计、水浴锅/恒温培养箱、低温离心机、可调式移液枪、1mL 石英比色皿、研钵/匀浆器、蒸馏水、冰和氯仿。 操作步骤：
一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）
1、 血清（浆）中 ATP 的提取：按照血清（浆）体积（mL）：提取液体积（mL）为 1：5~10 的比例（建议取约 0.1mL 血清（浆），加入 1mL 提取液），充分震荡，10000g，4℃离心 10min；取上清液至另一 EP 管中，加入 500μL
的氯仿充分震荡混匀，10000g 4℃离心 3min，取上清，置冰上待测（不可用于蛋白质含量测定）。
2、 组织中 ATP 的提取：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入
1mL 提取液），进行冰浴匀浆，8000g 4℃离心 10min，取上清至另一 EP 管中，加入 500μL 的氯仿充分震荡混匀，10000g 4℃离心 3min，取上清，置冰上待测（不可用于蛋白质含量测定）。
3、 细胞或细菌中 ATP 的提取：先收集细胞或细菌到离心管内，弃上清，按照细菌或细胞数量（104 个）：提取
液体积（mL）为 500~1000：1 的比例（建议 500 万细菌或细胞加入 1mL 提取液），超声波破碎（冰浴，功率 20%或 200W，超声 2s，停 1s，总时间 1min），10000g 4 ℃离心 10min；取上清液至另一 EP 管中，加入 500μL 的氯仿充分震荡混匀，10000g 4℃离心 3min，取上清，置冰上待测（不可用于蛋白质含量测定）。 注：以上提取过程严格控制在冰浴条件下进行。二、测定步骤
1、 紫外分光光度计预热 30min 以上，调节波长到 340nm，蒸馏水调零。
2、 标准溶液的稀释：取 100μL 10μmol/mLATP 标准溶液，加入 1.5mL 蒸馏水，充分混匀，配制成 0.625μmol/mL
标准液使用，现用现配。（实验中每管需要 100μL，为减小实验误差，故配制大体积。） 3、 样本测定： 试剂名称(μL) 样本 0.625μmol/mL 标准液 试剂一 工作液 测定管 100 - 640 260 标准管 - 100 640 260 将上述试剂分别加入比色皿后迅速吹打混匀，记录第 10s 的吸光值 A1 测定和 A1 标准，迅速置于 37℃ （哺乳动物）或 25℃（其他物种）水浴锅/恒温培养箱中准确反应 3min，拿出迅速擦干测定 3min10s 时的吸光值 A2 测定和 A2 标准，计算 ΔA 测定=A2 测定-A1 测定，ΔA 标准=A2 标准-A1 标准。 三、ATP 含量计算 1、 血清（浆）中 ATP 含量计算
ATP 含量(μmol/mL) =ΔA 测定÷（ΔA 标准÷C 标准）×（V 提取+V 血清（浆））÷V 血清（浆）
=6.875×ΔA 测定÷ΔA 标准
2、 组织、细菌或细胞中 ATP 含量计算 (1) 按样本质量计算
ATP 含量（μmol/g 质量）= ΔA 测定÷（ΔA 标准÷C 标准）×V 提取÷W
本产品仅供科学研究使用！请勿用于临床、诊断、食品、化妆品检测等用途！-上海液质检测技术有限公司
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=0.625×ΔA 测定÷ΔA 标准÷W
(2) 按细菌或细胞数量计算
ATP 含量(μmol/106 cell）=ΔA 测定÷（ΔA 标准÷C 标准）×V 提取÷5 =0.125×ΔA 测定÷ΔA 标准
C 标准：标准液浓度，0.625μmol/mL；V 提取：加入的提取液体积，1mL；V 血清（血浆）：血清（浆）体积，0.1mL； W：样本质量，g；5：细胞或细菌总数，5×106 个。 注意事项：
1、 加入提取液离心后的上清若为浑浊为正常现象。
2、 如果吸光值大于 1.1，建议将样本用提取液稀释后进行测定。注意计算公式中乘以稀释倍数；如果吸光值过低或接近空白，建议加大样本量后进行测定，注意同步修改计算公式。
本产品仅供科学研究使用！请勿用于临床、诊断、食品、化妆品检测等用途！-上海液质检测技术有限公司
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