Version 02172011 TRIzon Reagent TRIzon总RNA提取试剂 Cat. No. CW0580 保存：2-8℃避光 组分说明 Cat. No. TRIzon Reagent CW0580 20 ml CW0580A 100 ml CW0580B 5 ml 产品简介 TRIzon是广谱型总RNA提取试剂。实验操作快速方便，颜色鲜明，便于分层。本试剂适用范围广泛，可以从动物组织、植物材料、各种微生物及培养细胞等样品中提取总RNA。样品在TRIzon中被充解的同时能够最大限度地保证RNA的完整性。在加入氯仿离心后，溶液会分成三层：上层无色水相、中间层和下层红色有机相，RNA分布在上清层中。收集上清层后，经异丙醇沉淀便可以回收得到总RNA。提取的总RNA完整性好，无蛋白和DNA污染，可用于各种分子生物学常规实验，如RT-PCR、Real-time RT-PCR、Northern Blot、Dot Blot、体外翻译等。 注意事项 1. 预防RNase污染，应注意以下几方面： 1）使用无RNase的塑料制品和头，避免交叉污染。 2）玻璃器皿应在使用前于180℃高温下干烤4小时，塑料器皿可在0.5 M NaOH中浸泡10分钟，用水彻底冲洗后高压灭菌。 3）配制溶液应使用无RNase的水。 4）操作人员戴一次性口罩和手套，实验过程中要勤换手套。 2. 提取的样品避免反复冻融，否则影响RNA提取得率和质量。 3. 本品中含有苯酚，具有毒性和腐蚀性。如果吸入体内、接触皮肤、吞食等会导致中毒、灼伤以及其他身体伤害。使用本制品时应穿戴防护物品，如防护服装、手套、眼罩、面罩等。如果不小心接触到眼睛，应立即用大量的水冲洗并前往医院治疗。 4. 样品用TRIzon 匀浆后，如不即刻加入氯仿，置于-70℃下可放置一个月以上。 5. 保存在75%乙醇中的RNA沉淀，2-8℃可以保存一周，-20℃条件下可以保存1年。RNA半衰期比较短，容易降解，建议提取后尽快进行后续实验，如反转录成cDNA，Northern Blot等。 6. 若下游实验对DNA非常敏感，建议用不含RNase的DNase I（货号：CW2090A）对RNA进行处理。 自备试剂：氯仿、异丙醇、75%乙醇、无RNase的水（新开封或提取RNA专用） 操作步骤 1. 各种材料的处理 1a. 植物组织：取新鲜植物组织在液氮中充分研磨或将植物组织剪碎后直接在TRIzon中迅速研磨，每30-50 mg 组织加入1 ml TRIzon，混匀。 注意：样品体积一般不要超过TRIzon体积的10%。 1b. 动物组织：取新鲜或-70℃冻存动物组织尽量剪碎，每30-50 mg 组织加入1 ml TRIzon，匀浆仪进行匀浆处理。或在液氮中研磨后加入TRIzon 1 ml混匀。 注意：样品体积一般不要超过TRIzon体积的10%。 1c. 单层培养细胞：吸去培养液，加入适量TRIzon（每10 cm2面积需要1 ml TRIzon），反复吹打使细胞裂解。如果TRIzon的量不足可能导致RNA中有DNA污染。 1d. 细胞悬液：离心收集细胞。每5×106－1×107动物、植物和酵母细胞或每107细菌细胞加入1 ml TRIzon。 注意：加入TRIzon前不要洗涤细胞，以免RNA降解。 可选步骤：对于蛋白、脂肪、多糖或胞外物质含量高的样品，如肌肉组织、脂肪组织或植物的块茎，可以在匀浆处理后4℃，12,000 rpm（~13,400×g）离心10分钟以除去不溶物质，此时沉淀中含胞外物质、多糖和高分子量的DNA，而RNA存在于上清中。 2. 样品中加入TRIzon后反复吹打几次，使样本充解。室温放置5分钟，使蛋白核酸复合物完全分离。 3. 向以上溶液中加入氯仿，每使用1 ml TRIzon加入0.2 ml氯仿，盖好管盖，剧烈振荡15秒，室温放置2-3分钟。 4. 4℃ 12,000 rpm离心15分钟，此时样品分成三层：红色有机相，中间层和上层无色水相，RNA 主要在水相中，把水相（约600 μl）转移到一个新的RNase-Free离心管（自备）中。 5. 在得到的水相溶液中加入等体积异丙醇，颠倒混匀，室温放置10分钟。 6. 4℃ 12,000 rpm 离心10分钟，弃上清。 7. 加入75%乙醇（用无RNase的水配制）洗涤沉淀。每使用1 ml TRIzon用1 ml 75%乙醇对沉淀进行洗涤。 8． 4℃ 12,000 rpm离心3分钟，小心吸弃上清，注意不要吸弃RNA沉淀。 注意：剩余的少量液体可短暂离心，然后用头吸出，注意不要吸弃沉淀。 9. 室温放置2-3分钟，晾干。加入30-100 μl无RNase的水，充分溶解RNA，得到的RNA保存在-70℃，防止降解。 注意：沉淀不要过分干燥，以免难于溶解。
