【知识梳理】 一、培养基
1．营养成分：一般都含有 、 、氮源、 ，还需满足不 同微生物对pH、 （如生长因子）以及O2等的要求。
2．允许特定微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基，称做 培养基 二、无菌技术 1．消毒：
（1）特点：使用较为 的物理或化学方法仅杀死物体表面或内部的部分微生物（不 包括芽孢和 ）。
（2）常用方法：煮沸消毒法、 、化学药剂消毒法、 。 2．灭菌：
（1）特点：指使用强烈的理化因素杀死物体内外 （包括芽孢和孢子）。 （2）常用方法： 灭菌、干热灭菌、 灭菌。 三、微生物培养的过程
1．配制培养基：计算→称量→ → →倒平板。
2．接种方法： 法、 法。注意事项：整个操作过程都要在 旁完成。
3．培养：接种后的培养皿放入 内培养。 四、细菌的计数
1．平板计数公式：每克样品中的菌株数 = C：某一稀释度下平板上生长的平均菌落数 V：涂布平板时所用的稀释液的体积 (ml) M：稀释倍数 2．在显微镜下直接计数 五、菌种保藏
1．临时保藏：采用 培养基，菌落长成后，放入4C冰箱中保藏。 2．长期保存： 法，放在－20 ℃下保存。 【例 题】
例1． 自养型微生物与异养型微生物的培养基的主要差别是（ ） A．碳源 B．氮源 C．无机盐 D．水
例２．实验室常用的消毒和灭菌方法 牛 奶 酒 精 接 种 环 灼 烧 培 养 皿 干热灭菌
培 养 基 巴氏消毒法
实验室空气 紫外线照射 实验者双手 高压蒸汽灭菌
例3.某同学在稀释倍数为10的培养基中测得平板上平均菌落数为234，那么每克样品中
的菌落数为（涂布平板时所用稀释液的体积为0.1ml）( ) A. 2.34×10 B. 2.34×10 C. 234 D. 23.4
【考题回顾】
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1．（2011·全国）有些细菌可分解原油，从而消除由原油泄漏造成的土壤污染。某同学欲 从受原油污染的土壤中筛选出高效降解原油的菌株。回答问题：
（1）在筛选过程中，应将土壤样品稀释液接种于以 为唯一碳源的固体培养基上，从功 能上讲，该培养基属于 培养基。
（2）纯化菌种时，为了得到单菌落，常采用的接种方法有两种，即 和 。 （3）为了筛选出高效菌株，可比较单菌落周围分解圈的大小，分解圈大说明该菌株的降解 能力 。
（4）通常情况下，在微生物培养过程中实验室常用的灭菌方法有灼烧灭菌、
和 。无菌技术要求实验操作应在酒精灯 附近进行，以避免周 围环境中微生物的污染。
2（2007．宁夏卷）某小组同学为了调查湖水中细菌的污染情况而进行了实验。实验包括制[高考资源网]
备培养基、灭菌、接种及培养、菌落观察与计数。请回答与此实验相关的问题。 （1）培养基中含有的蛋白胨、淀粉分别为细菌培养提供了 和 。除此 之外，培养基还必须含有的基本成分是 和 。 （2）对培养基进行灭菌，应该采用的方法是 。
（3）为了尽快观察到细菌培养的实验结果，应将接种了湖水样品的平板置于 中培养，培养的温度设定在37℃。要使该实验所得结果可靠，还应该同时在另一平板 上接种 作为对照进行实验。
（4）培养20小时后，观察到平板上有形态和颜色不同的菌落，这说明湖水样品中有 种细菌。一般说来，菌落总数越多，湖水遭受细菌污染的程度越 。 （5）如果提高培养基中NaCl的浓度，可以用于筛选耐 细菌，这种培养基被称为 。 【模拟测试】
高三生物兴趣小组为调查学校游泳池里水的污染情况，进行了包括制备培养基、灭菌、接种及培养、菌落观察与计数等一系列操作，请回答相关问题：
（1）培养基中除了要含有 、碳源、氮源、水等营养成分外，还必须满足微生物生长
对pH、 （如生长因子）和氧气的要求。
（2）培养基配制完成后还需放入 内灭菌，然后采用 法或 法接种微生物，并将接种后的培养基放入 中培养。
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（3）在稀释倍数为10的培养基中测得平板上菌落数的平均数为225，那么每克样品中的菌
落数是 （涂布平板时所用稀释液的体积为0.1ml），估算出的该数据比活菌的实际数目要 （高或低）。
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