组织蛋白酶B在阿尔茨海默病发病中的作用研究

Electronic Journal of Clinical Medical Literature

2019 年第 6 卷第 34 期2019 Vol.6 No.34

组织蛋白酶B在阿尔茨海默病发病中的作用研究

陈 影，王振峰，张 华，姚祥巍，王群鹏，陆秦双，刘玉驰（哈尔滨市第四医院神经内科，黑龙江 哈尔滨 150000）

【摘要】目的 探讨分析组织蛋白酶B在阿尔茨海默病发病中的作用。方法 体外培养星形胶质细胞，将不同浓度Aβ1-40加入星形胶质细胞中共同培养，观察细胞形态学改变，应用western blot法分别测定加药组和不加药组细胞上清液CB蛋白的表达情况。体外培养PC12细胞，将上述不同浓度Aβ1-40与星形胶质细胞共同培养上清液分别加入PC12细胞中。另设置对照组，在检出CB的上清液中分别加入CB抑制剂后再加入PC12细胞中，应用FDA染色法检测上清液对PC12细胞活性的影响。结果 Aβ1-40可导致星形胶质细胞坏死，具有诱导星形胶质细胞释放CB蛋白的作用。伴随Aβ1-40细胞浓度升高，PC12细胞凋亡率上升。加入CB蛋白抑制剂后，凋亡率出现显著性下降，P＜0.05。结论 组织蛋白酶B参与阿尔茨海默病相关致病细胞的凋亡过程，CB蛋白的表达一定程度上影响阿尔茨海默病的发展演变。

【关键词】组织蛋白酶B；阿尔茨海默病；蛋白表达

【中图分类号】R741 【文献标识码】A 【文章编号】ISSN.2095-8242.2019.34.170.01

阿尔茨海默病为临床常见中枢神经系统病变，疾病多发于老年人群，属于老年痴呆的主要类型。阿尔茨海默病脑组织内老年斑主要由β淀粉样蛋白（Aβ）高度集聚形成。脑内Aβ的产生是阿尔茨海默病发病的主要原因[1]。组织蛋白酶B属于蛋白水解酶，其可干预Aβ代谢，间接性参与阿尔茨海默病的发生发展。本次研究主要探讨组织蛋白酶B在阿尔茨海默病患者发病中的作用，具体报告如下。

Aβ1-40细胞干预浓度达到20 μmol/L时，可见CB蛋白阳性表达信号带。伴随Aβ1-40细胞浓度升高，CB蛋白表达增强。

2.2 PC12细胞凋亡情况分析未加入CB细胞抑制剂组的细胞凋亡率明显高于CB细胞抑制组，组间比较P＜0.05；伴随浓度升高，PC12细胞凋亡率呈现升高态势。

表1 PC12细胞凋亡率（%）

CB抑制剂无有

浓度（μmol/L）

00.180.11

515.6310.28

1024.2917.46

2035.0024.86

4041.2330.02

6043.2732.10

1 资料与方法

1.1 一般资料

PC12细胞、Aβ1-40、星形胶质细胞、CA-074（Me）。1.2 方法

体外培养选取星形胶质细胞，将对数生长期细胞接种于培养板。将事先配置好的5/10/20/40/60μmol/L Aβ1-40加入星形胶质细胞。另设置不加Aβ1-40的对照组，培养24小时观察细胞形态。相同条件下，将星形胶质细胞置于培养瓶中，加入不同浓度Aβ1-40，并设置空白对照。分别培养24小时后，western blot法测定上清液CB蛋白的表达情况。 体外培养PC12细胞，将对数生长期细胞接种于培养板。将上述不同浓度Aβ1-40与星形胶质细胞共同培养上清液分别加入PC12细胞中，并设置空白对照。另选取上述相同条件下PC12细胞，在检出CB的上清液中分别加入CB抑制剂后再加入PC12细胞中。培养48小时后收集细胞，检测PC12细胞凋亡率。

1.3 统计学方法研究获取数据录入统计学工具：SPSS 20.0，计数资料：x检验，计量资料：t检验，P＜0.05表示存在统计学意义。

2

3 讨 论

蛋白酶在机体肝肾、神经细胞等组织及细胞广泛存在，常规状态下以酶原形式储存。病理状态下溶酶体膜失稳，通透性升高，大量蛋白酶释放并激活，参与到疾病的病理变化过程中。相关研究显示，组织蛋白酶B的释放激活与Aβ的清除效能相关[2]。而阿尔茨海默病的发病与Aβ的产生及消除相关，故本次研究探索性分析组织蛋白酶B在阿尔茨海默病发病中的作用。

本次研究显示，Aβ1-40具有诱导星形胶质细胞释放CB蛋白的作用，伴随Aβ1-40细胞浓度升高，PC12细胞凋亡率上升。加入CB蛋白抑制剂后，凋亡率出现显著性下降， P＜0.05。

综上所述，组织蛋白酶B的表达一定程度上影响阿尔茨海默病的发展演变，其可作为阿尔茨海默病的阶段性评估指标。

2 结 果

2.1 Aβ1-40细胞对星形胶质细胞形态改变及CB细胞表达的影响

常规星形胶质细胞为分支多、突起短粗，形状呈扁平、多角。经Aβ1-40细胞干预，星形胶质细胞出现形态学变化，细胞胞体逐渐肥大，细胞增殖受阻。伴随时间延长，Aβ1-40细胞干扰下的星形胶质细胞出现坏死现象，胞质浓缩，伪足消失。检测星形胶质细胞CB蛋白表达情况：

参考文献

[1] 宋 昕,洪羽蓉,胡秋莹,等.阿尔茨海默病发病原因及机制的研

究进展[J].临床和实验医学杂志,2015,(10):871-873.

[2] Rocken C,Fandrich M,Stix B et al.Cathepsin protease activity

modulates amyloid load in extracerebral amyloidosis.[J].Journal of Pathology:Journal of the Pathological Society of Great Britain and Ireland,2006,210(4):478-487.

本文编辑：李 豆

基金项目：黑龙江省卫生计生委科研课题，课题编号：2017-219