维普资讯 http://www.cqvip.com 临床内科杂志２００７年７月第２４卷第７期Ｊ Ｃｌｉｎ Ｉｎｔｅｒｎ Ｍｅｄ，Ｊｕｌｙ ２００７，Ｖｏｌ，２４，Ｎｏ．７ ．２Ｌ９３． ・临床基础研究・ 幽门螺杆菌对细胞色素氧化酶基因Ⅱ表达 的影响及其临床意义 兰春慧房殿春 ［文献标识码］Ａ ［文章编号］１００１－９０５７（２００７）０７－０４９３－０３ 将６ ｒｎｌ ［中图分类号］Ｒ７３５．２ ［摘要］ 目的观察幽门螺杆菌（Ｈ．ｐｙｌｏｒｉ）培养滤液作用于胃癌细胞后，细胞色素氧化酶Ⅱ （ＣＯＸ．ＩＩ）ｍＲＮＡ及其蛋白表达的变化，探讨Ｈ．ｐｙｌｏｒｉ致胃癌的可能分子机制。方法Ｈ．ｐｙｌｏｒｉ培养滤液与胃癌细胞分别作用４、８、１２小时，收集细胞，提取ＲＮＡ，应用ＲＴ－ＰＣＲ和Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ法检测各时间点ＣＯＸ．ＩＩ ｍＲＮＡ及其蛋白表达。结果 正常情况下，胃癌细胞ＣＯＸ－ＩＩ ｍＲＮＡ 稳定表达。Ｈ．ｐｙｌｏｒｉ培养滤液分别作用４、８、１２小时后，其表达量呈缓慢下降趋势，８、１２小时的表 达量显著低于对照组（Ｐ＜０．０５）。ＣＯＸ—ＩＩ蛋白的表达呈现相似的趋势。结论Ｈ．ｐｙｌｏｒｉ可引起胃 癌细胞线粒体编码基因ＣＯＸ—ＩＩｍＲＮＡ和蛋白的表达障碍，影响线粒体功能。 ［关键词］ 幽门螺杆菌； 胃癌细胞； 线粒体； 细胞色素氧化酶Ⅱ Ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ Ｈｄｅｃｏｂａｃｔｅｒ Ｐｙｌｏｒｉ ｏｎ ｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａｌ ｃｙｔｏｃｈｒｏｍｅ ｏｘｉｄａｓｅ ｓｕｂｕｎｉｔⅡｉｎ ｇａｓｔｒｉｃ ｃａｒｅｅｒ ｃｅｌｌｓ Ⅳ ｕｎｉｔ ． Ｄｉａｎｃｈｕｎ．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ，Ｓｏｕｔｈｗｅｓｔ Ｈｏｓｐｉｔａｌ，ｔｈｅ Ｔｈｉｒｄ 口 Ｍｅｄｉｃａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓ ，Ｃｈｏｎｇｑｉｎｇ ４０００３８，Ｃｈｉｎａ ［Ａｂｓｔｒａｃｔ］０ｂｊｅｃｔｉｖｅ Ｔｏ ｓｔｕｄｙ ｔｈｅ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｅｄ Ｈ．ｐｙｌｏｒｉ ｃｕｌｔｕｒｅ ｓｕｐｅｍａｔａｎｔ（ＣＨＣＳ） ｏｎ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ＣＯＸ．ＩＩ ｍＲＮＡ ａｎｄ ｐｒｏｔｅｉｎ ｅｎｃｏｄｅｄ ｂｙ ｍｔＤＮＡ ｉｎ ｇａｓｔｒｉｃ ｃａｒｃｉｎｏｍａ ｃｅｌｌｓ．ａｎｄ ｅｘｐｌｏｒｅ ｔｌｌｅ ｐｏｔｅｎｔｉａｌ ｒｏｌｅ ｏｆ Ｈ．ｐｙｌｏｒｉ ｉｎ ｔｈｅ ｇａｓｔｒｉｃ ｃａｒｃｉｎｏｇｅｎｅｓｉｓ．Ｍｅｔｈｏｄｓ Ａｆｔｅｒ ｔｒｅａｔｅｄ ｗｉｔｈ ６ｖｄ／ｍｌ ＣＨＣＳ ｆｏｒ ４、 ８、１２ｈ，ｇａｓｔｒｉｃ ｃａｒｃｉｎｏｍａ ｃｅｌｌｓ ｗｅｒｅ ｃｏｌｌｅｃｔｅｄ ａｎｄ ｔｈｅ ＲＮＡ ａｎｄ ｐｒｏｔｅｉｎ ｆｒｏｍ ｔｌｌｅ ｃｅｌｌｓ ａｔ ｄｉｆｅｒｅｎｔ ｔｉｍｅｓ ｗｅｒｅ ｅｘｔｒａｃｔｅｄ．Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ＣＯＸ．ⅡｍＲＮＡ ａｎｄ ｐｒｏｔｅｉｎ Ｗａｓ ｄｅｔｅｅｔｅｄ ｂｙ ＲＴ．ＰＣＲ ａｎｄ Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ．Ｒｅ－ ｓｕｉｔｓ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｇａｓｔｒｉｃ ｃａｎｅｃｒ ｃｅｌｌｓ ＣＯＸ．ⅡｍＲＮＡ ｂｅｈａｖｅｄ ｓｔｅａｄｉｌｙ．Ａｆｔｅｒ Ｈ．ｐｙｌｏｒｉ ｃｕｌｔｕｒｉｎｇ ｆｉｌｔｒａｔｅ ｉｎｃｕｂａｔｅｄ ｆｏｒ ４ｈ，８ｈ，１２ｈ ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ，ｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｄｅｃｒｅａｓｅｄ ｓｌｏｗｌｙ．Ｅｓｐｅｃｉａｌｌｙ ｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｆｏｒ ８ｈ， １２ｈ Ｗａｓ ｄｒａｍａｔｉｃａｌｌｙ ｌｏｗｅｒ ｔｌｌｎ ｔａｈａｔ ｏｆ ｃｏｎｔｒｏｌ ｇｒｏｕｐ（Ｐ＜０．０５）．Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ＣＯＸ．Ⅱｐｒｏｔｅｉｎ ｒｅｖｅａｌｅｄ ｔｈｅ ｓａｌｌｌｅ ｔｒｅｎｄ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎｓ Ｈ．ｐｙｌｏｒｉ ｃｏｕｌｄ ａｆｆｅｃｔ ｍｉｔｏｅｈｏｎｄｒｉａｌ ｆｕｎｃｔｉｏｎ ｂｙ ｄｏｗｎ．ｒｅｇｕｌａｔｉｎｇ ｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓ－ ｓｉｏｎ ｏｆ ｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａｌ ｅｎｃｏｄｉｎｇ ｅｙｔｏｅｈｍｍｅ ｏｘｉｄａｓｅⅡｇｅｎｅ． ［Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ］Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ ｐｙｌｏｒｉ； Ｇａｓｔｉｒｃ ｃａｒｃｉｎｏｍａ ｃｅｌｌ； Ｍｉｔｏｃｈｏｎｄｄａ； Ｃｙｔｏｃｈｒｏｍｅ ｏｘｉ－ ｄａｓｅ ｓｕｂｕｎｉｔ ＩＩ 幽门螺杆菌（Ｈ．ｐｙｌｏｒｉ）诱发胃癌的机制未阐明。 既往的研究表明，胃黏膜细胞核基因组有线粒体ＤＮＡ （ｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａｌ ＤＮＡ，ｍｔＤＮＡ）片段的整合，且这种整合 与Ｈ．ｐｙｌｏｒｉ感染有关，并参与胃癌的发生…。ｍｔＤＮＡ 片段与核基因整合后，是否会引起所编码基因表达的 材料与方法 １．材料：胃癌细胞株ＳＧＣ７９０１和Ｈ．ｐｙｌｏｒｉ ＮＣＴＣ １１６３７菌种由本室保存；ＲＰＭＩ １６４０购自Ｓｉｇｍａ公司； 胎牛血清购自华美公司；Ｔｒｉｐｕｒｅ购自Ｒｏｃｈｅ公司；逆 转录试剂盒购自Ｐｒｏｍｅｇａ公司；ＰＣＲ试剂盒及ＤＡＮ Ｍａｒｋｅｒ购自Ｔａｋａｒａ公司ｏ ２．方法 改变，这种改变是否与Ｈ．ｐｙｌｏｒｉ感染有关，有待研究。 为了进一步明确上述问题，我们观察了Ｈ．ｐｙｌｏｒｉ对线 粒体编码基因细胞色素氧化酶Ⅱ（ＣＯＸ—ＩＩ）ｍＲＮＡ表 达的影响，希望能较深人地探讨线粒体损伤在Ｈ．ｐｙｌｏ— ｒｉ致胃癌中的作用。 （１）Ｈ．ｐｙｌｏｒｉ培养滤液的制备：取出１管本室保 存的ＮＣＴＣ １１ ６３７菌种，并进行鉴定。参照Ｌｅｕｎｋ 等 的方法以布氏肉汤于３７℃微需氧条件下旋转 （１２０ ｒ／ｍｉｎ）培养７２小时，培养液于１２ ０００低温离心 ３Ｏ分钟，上清液经０．２２ ｍ微孔滤膜过滤除菌，冷冻 基金项目：国家自然科学基金（３９８７０３４５）和军内“十五”重点课题 （０１７－／）７５）资助 浓缩２０倍，低温保存备用，以相同方法（不加Ｈ．ｐｙｌｏ— 作者单位：４０００３８四川重庆，第三军医大学西南医院全军消化中心 通讯作者：房殿春，Ｅ—ｍａｉｌ： ｇｄｉａｎｅｈｕｎ＠ｈｏｔｍａｉｌ．ｅｏｍ ｒｉ）制备肉汤滤液作为对照。 （２）细胞培养：ＳＧＣ ７９０１细胞置于３７℃，饱和湿 维普资讯 http://www.cqvip.com ・４９４・ ｝缶床内科杂志２００７年７月第２４卷第７期Ｊ Ｃｌｉｎ Ｉｎｔｅｒｎ Ｍｅｄ，Ｊｕｌｙ ２００７，Ｖｏｌ，２４，Ｎｏ．７ 度，含５％ＣＯ 的孵箱中培养，培养液ＲＰＭＩ １６４０含 １００ ｍＬ／Ｌ胎牛血清，１００ ＫＵ／Ｌ青霉素和１００ ｍｇ／Ｌ链 ２．Ｗｅｓｔｅｍ ｂｌｏｔ检测线粒体ＤＮＡ ＣＯＸ．Ｉ１蛋白的表 达变化：见图２。Ｈ．ｐｙｌｏｒｉ培养滤液作用４小时后， ＣＯＸ．Ｉ１蛋白的表达明显下降，８小时继续下降，１２小 霉素。根据细胞生长状况每２—３天换液１次，当细胞 生长状态稳定，呈对数生长期时，将６￣ｌ／ｍｌ的Ｈ．ｐｙ－ ｌｏｒｉ培养滤液与胃癌细胞分别作用４小时、８小时、１２ 小时，对照组用肉汤滤液替代Ｈ．ｐｙｌｏｒｉ培养滤液与胃 癌细胞作用１２小时，收集各时相点的细胞，用于下一 步实验。 （３）引物设计：根据ＧｅｎＢａｎｋ中的Ｈｕｍａｎ ｍｉｔｏ－ ｃｈｏｎｄｒｉａｌ ｇｅｎｏｍｅ ｓｅｑｕｅｎｃｅ应用Ｗｈｉｔｅｈｅａｄ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｆｏｒ ＢｉｏｍｅｄｉｃａｌＲｅｓｅａｒｃｈ、＾ｒ、 ｗ ｐｒｉｍｅｒ ｐｉｃｋｉｎｇ ｓｏｆｔｗａｒｅ（ｐｒｉｍｅｒ ３）进行引物设计，上海博亚公司合成。ＰＣＲ引物序 列：ＣＯＸ—Ｉ１：５’一ＴＡＧＴＣＣＴＧＴＡＴＧＣＣＣ唧Ｃ．３’，５’． ＣＧＴＡＧＴＣＧＧＴＧＴＡＣＴＣＧＴＡ Ｇ．３’，内对照Ｂ—ａｃｔｉｎ： ５’一ＣＣＡＧＡＧＣＡＡＧＡＧＡＧＧＴＡＴＣＣ．３’．５’．ＣＴＧＴＧＧＴＧ－ ＧＴＧＡＡＧＣＴＧＴＡＧ．３’。 （４）ＲＴ—ＰＣＲ检测：ＣＯＸ．ＩＩ ｍＲＮＡ的变化应用日 本宝生物公司ＴａＫａＲａ ＲＴ－ＰＣＲ Ｋｉｔ（ＡＭＶ），按要求操 作。逆转录反应条件是７４℃５分钟，４５ ｏＣ １小时。 ＰＣＲ扩增循环条件是９５℃预变性５分钟，９５℃变性 ５５秒，５２℃退火５Ｏ秒，７２℃延伸１分钟，反应３２个循 环，最后７２℃再延伸ｌＯ分钟。琼脂糖凝胶电泳检测， 紫外灯下观察，凝胶成像系统扫描存盘。记录各条带 积分光密度（ＩＯＤ），将各个检测基因与自身Ｂ－ａｃｔｉｏｎ 条带ＩＯＤ相比较得到其相对ＩＯＤ。 （５）Ｗｅｓｔｅｍ．ｂｌｏｔ分析：收集培养的细胞，ＰＢＳ洗 涤，按１０。／ｍｌ的细胞浓度加入细胞裂解缓冲液，置冰 上孵育３Ｏ分钟，于４℃１２ ０００ ｇ离心１５分钟，取上清 液，用Ｌｏｗｒｙ法蛋白定量，每组取５Ｏ ｇ蛋白，用１５％ 聚丙烯酰氨凝胶电泳，考马斯亮蓝染色标记Ｍａｒｋｅｒ，然 后转移至ＰＶＤＰ膜上，６％脱脂奶粉室温封闭１小时，４ ℃过夜，洗涤后，膜和小鼠抗ＣＯＸ－Ｉ１单抗（１：４００）作 用，室温反应２小时，洗涤后加入抗小鼠ＨＲＰ－ＩｇＧ （１：２５００），室温反应１小时，化学发光试剂检测，Ｘ光 片显影。凝胶成像系统分析结果。 ３．统计学处理：数据以均数±标准差（ ±ｓ）表示， 以ＳＰＳＳ ９．０版专用统计分析程序对各组数据进行单 因素方差分析。 结 果 １．Ｈ．ｐｙｌｏｒｉ培养滤液对胃癌细胞ＣＯＸ—Ｉ１基因表 达的影响：见图１。正常情况下，胃癌细胞ＣＯＸ．Ｉ１ ｍＲ— ＮＡ稳定表达。Ｈ．ｐｙｌｏｒｉ培养滤液分别作用４、８、１２小 时后，其表达量呈缓慢下降趋势，８、１２小时的表达量 显著低于对照组（Ｐ＜Ｏ．０５）。 时后其下降更明显（Ｐ＜０．０５）。 Ａｃｔｉｎ ４３６ ｂＤ ＣＯＸ—ｌｌ ２：３１ ｈｎ 注：Ｍ为标记；泳道１－４分别代表６ ／ｍ的Ｈ．ｐｙｌｏｒｉ培养滤液与 胃癌细胞不作用、作用４小时、８小时、ｌ２小时的ＣＯＸ—ＩＩｍＲＮＡ表达量 图ｌ ＣＯＸ．ＩＩ ｍＲＮＡ ＲＴ－ＰＣＲ扩增产物电泳结果比较 图２ Ｈ．ｐｙｌｏｒｉ作用胃癌ＳＧＣ－７９０１细胞后ＣＯＸ－Ⅱ蛋白 的表达变化比较 讨 论 细胞色素氧化酶（Ｃｙｔｏｃｈｒｏｍｅ ｏｘｉｄａｓｅ，ＣＯＸ）由线 粒体ＤＮＡ编码，是位于线粒体内膜上呼吸链末端的限 速酶，是唯一能将电子传给氧分子的细胞色素复合物， 是呼吸链氧化磷酸化过程中关键酶，其损伤可直接影 响线粒体功能 ４。。本研究发现Ｈ．ｐｙｌｏｒｉ培养滤液作 用４小时后，与对照组相比，线粒体ＣＯＸ－Ｉ１ ｍＲＮＡ的 表达量开始降低，８小时下降更明显，１２小时下降速度 减缓，表明Ｈ．ｐｙｌｏｒｉ可使线粒体编码基因ｍＲＮＡ表达 减少，转录活性降低。李建明等 发现Ｈ ０ 可明显 损伤ｍｔＤＮＡ编码的细胞色素氧化酶基因，导致ＣＯＸ Ｉ和ＣＯＸ—Ｉ１出现点突变和缺失突变，从而引起所编码 的酶蛋白活性明显下降。我们过去的研究表明， Ｈ．ｐｙｌｏｒｉ感染者黏膜组织脂质过氧化产物显著增 加 Ｊ。由此推测，Ｈ．ｐｙｌｏｒｉ感染引起氧自由基增加，当 自由基产生增多且不能被抗氧化剂中和时，可泄出对 维普资讯 http://www.cqvip.com 临床内科杂志２００７年７月第２４卷第７期Ｊ Ｃｌｉｎ Ｉｍｅｍ Ｍｅｄ，Ｊｕｌｙ ２００７，Ｖｏｌ。２４，Ｎｏ．７ ・４９５・ 膜脂、蛋白质、ＤＮＡ及其它生物大分子造成损伤，在 ＤＮＡ中生成胸苷乙二醇和８一羟基鸟嘌岭，抑制了转录 和翻译，使ＣＯＸ表达降低。 Ｈ．ｐｙｌｏｒｉ可引起胃上皮细胞凋亡增加，使凋亡和 内整合与幽门螺杆菌感染有关．中华消化杂志，２００３，２３：８Ｏ－８３． 【２］Ｌｅｕｎｋ ＲＤ，Ｊｏｈｎｓｏｎ ＲＴ，Ｄａｖｉｄ ＢＣ，ｅｔ ａ１．Ｃｙｔｏｔｏｘｉｃ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｉｎ ｂｒｏｔｈ－ｃｌｌ１． ｔｕｒｅ ｆｉｌｔｒａｔｅｓ ｏｆ ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ ｐｙｌｏｒｉ．Ｊ Ｍｅｄ Ｍｉｅｏｂｉｏ１．１９９８．２６：９３． 【３】Ｂａｒｒｉｅｎｔｏｓ Ａ．Ｂａｒｆ．ｓ ＭＨ．Ｖａｌｎｏｔ ｌ。ｅｔ ８１．Ｃｙｔｏｃｈｒｏｍｅ ｏｘｉｄａｓｅ ｉｎ ｈｅａｌｔｈ ａｎｄ ｄｉｓｅａｓｅ．Ｇｅｎｅ。２Ｏｏ２。２８６：５３－６３． Ｉ ４ １ Ｋａｄｅｎｂａｃｈ Ｂ。Ａｍｏｌｄ Ｓ，Ｌｅｅ Ｉ。ｅｔ ａ１．Ｔｈｅ ｐｏｓｓｉｂｌｅ ｒｏｌｅ ｏｆ ｃｙｔｏｃｈｒｏｍｅ ｃ ｏｘｉｄａｓｅ ｉｎ ｓｔｒｅｓｓ．ｉｎｄｕｃｅｄ ａｐｏｐｔｏｓｉｓ ｎｄ ｄｅｇｅｎｅｒａｔｉａｖｅ ｄｉｓｅａｓｅｓ．Ｂｉｏｃｈｉｍｉ— 增殖失衡，导致胃癌发生。这是Ｈ．ｐｙｌｏｒｉ致胃癌的机 ｃａｅｔ Ｂｉｏｐｈｙｓｉｃａ Ａｃｔａ．Ｂｉｏｅｎｅｒｇｅｔｉｃｓ．２Ｏｏ４。１６５５：４００－４０８． 理之一，但其中许多环节和影响因素尚不明确。细胞 凋亡是一个由多种因素引起、多分子参与的复杂过程， 而目前认为线粒体是凋亡的中心。本研究发现 Ｈ．ｐｙｌｏｒｉ感染可引起ＣＯＸ基因的表达下降，而ＣＯＸ基 ［５］李建明，蔡黔，周红，等．过氧化氢对肠上皮细胞线粒体的损伤作 用．第三军医大学学报，２０９４，２４：１４２—１４４． ［６］粱后杰，刘为纹，房殿春，等．幽门螺杆菌培养滤液诱癌和促癌作用 的实验研究．中华医学杂志，１９９８，１７８：４８５－４８７． 【７】Ｇｒｅｅｎ ＤＲ，Ｒｅｅｄ ＪＣ．Ｍｉｔｏｃｈｏｎｄｆｉａ ａｎｄ ａｐｏｐｔｏｓｉｓ．ＳＣｉｅｎｃｅ，１９９８，２８１： １３ｏ９—１３Ｉ２． 因的表达改变直接反映了线粒体的功能，一旦线粒体 【８】Ｗａｌｌａｃｅ ＤＣ．Ｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａｌ ｄｉｓｅａｓｅｓ ｉｎ ｍａｎ ａｎｄ ｍｏｕｓｅ．Ｓｃｉｅｎｃｅ．１９９９． ２８３：Ｉ４８２．１４８８． 功能受损，首先影响能量合成，使膜电位（△ ｍ）丧失， 促使呼吸链大量产生ＲＯＳ（Ｒｅａｃｔｉｖｅ ｏｘｙｇｅｎ ｓｐｅｃｉｅｓ， ｎｏｓ），活化凋亡信号通路，细胞出现死亡（凋亡或坏 死），影响细胞的生物学行为，使其发生恶变…。。。 总之，Ｈ．ｐｙｌｏｒｉ可引起胃癌细胞线粒体编码基因 ＣＯＸ一ⅡｍＲＮＡ的表达障碍，并影响线粒体功能，为进 一【９ Ｉ Ｐａｔｅｌｌａ Ｐ，Ｘｉａｏ Ｙ，Ｆ１ｉｓｓ Ｍ，ｅｔ ａ１．Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｏｆ ｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａｌ ＤＮＡ ｍｕｔａ－ ｔｌｏｎｓｉｎ ｐｒｉｍａｒｙ ｂｒｅａｓｔ ｃ￣ｌｌｃｅｒ ａｎｄ ｆｉｎｅ—ｎｅｅｄｌｅ ａｓｐｌｍｔｅｓ．Ｃａｌｌｅｒ Ｒｅｓ。ｃ ２ｏｏ１．６１：７６２３－７６２６． ［１０］陈孝，王孟薇，尤纬蒂．胃黏膜上皮异型增生细胞增殖活性及凋亡 与幽门螺杆菌感染的关系．癌症，２００３，２２：２４４－２４７． （收稿１３期．．２００６—１０－３１） （本文编辑：李庆宪） 步揭示Ｈ．ｐｙｌｏｒｉ致胃癌的分子机制提供新的线索。 参考文献 ［１］凌贤龙，房殿春，周晓东，等．胃黏膜细胞线粒体ＤＮＡ不稳定及核 ・论著摘要・ 异甘草酸镁对原发性胆汁性肝硬化患者 ＣＤ４＋ＣＤ￣ｈｉｇｈ调节性Ｔ细胞的影响 李明 诸葛洪祥朱传武胥萍 罗湘蓉 叶建中 朱伟［文献标识码】Ｂ 钱峰王海燕 ［中图分类号】Ｒ６５７．３１ ［文章编号】１００１－９０５７（２００７）０７－０４９５－０２ ［关键词】异甘草酸镁； 原发性胆汁性肝硬化； ｃＤ ＣＤｚ￣ｈｌｓｈ调节性Ｔ细胞 原发性胆汁性肝硬化（ＰＢＣ）是一种肝内胆管呈现慢性非 年。（２）熊去氧胆酸组：７例，均为女性，年龄３６～６４岁，平均年 龄４７．６岁，平均病程５．８年。两组病例在性别、年龄、肝功能等 方面经统计学比较具有可比性。（３）对照组：ｌ０名，为健康献血 员，均为女性，年龄２４～４５岁，平均年龄３５．１岁。 ２．方法 化脓性肉芽肿性胆管炎的自身免疫性肝脏疾病，其发病与自身 免疫耐受被打破有关。ＣＤ４＊ｃＤ ｈｉｇｈ调节性Ｔ细胞（简称调节 性ＴＣ）在外周免疫耐受机制中发挥着重要的作用。目前尚无 理想的治疗方案，异甘草酸镁具有抑制氢化可的松代谢酶和很 强的抗炎作用，我们采用异甘草酸镁治疗原发性胆汁性肝硬 化，观察其疗效以及对调节性ＴＣ的影响，以探讨异甘草酸镁的 （１）治疗方法：异甘草酸镁组采用异甘草酸镁注射液（准字 号为Ｈ２００５１９４２，江苏正大天晴药业股份有限公司生产），每天 １次，每次１００ ｍｇ，稀释至２５０ ｍｌ后静脉滴注；熊去氧胆酸组采 用熊去氧胆酸片（注册号为Ｈ２００５０１８１，德国ＧｍｂＨ生产），每 可能作用机制。 对象与方法 １．对象：本院２００５年１１月～２００６年１１月住院未经激素治 疗的ＰＢＣ患者ｌ８例，诊断符合美国肝病学会２０００年版ＰＢＣ诊 疗指南” ，随机进行分组治疗观察。（１）异甘草酸镁组：１Ｉ例， 天１５ ｍｇ／ｋｇ，分３次口服，两组常规护肝和支持治疗均相同，两 组疗程均为４周。 男ｌ例，女ｌ０例，年龄３４～６７岁，平均年龄４９．６岁，平均病程６．２ （２）治疗前后肝功能指标的观察：包括丙氨酸氨基转氨酶 （ＡＬＴ）、总胆红素（ＴＢＩＬ）、碱性磷酸酶（ＡＬＰ）、谷氨酰转肽酶 （ＧＧＴ），采用常规实验室检查方法检测。 作者单位：２１５００７江苏苏州，苏州大学医学院病原生物学教研室（李 （３）调节性Ｔｃ和ＣＤ；Ｔ细胞的检测：取肝素抗凝外周全血 明、诸葛洪祥）；江苏省苏州市第五人民医院传染科（朱传武、胥萍、罗湘 加入ｃＤ 一ＰＥ和ＣＤ４一兀１、Ｃ单克隆抗体（美国 蓉、叶建中、朱伟、钱峰、王海燕）通讯作者：诸葛洪祥，Ｅ—ｍａｉｌ：ｈｘｚｈｕｇｅ＠ 分别置于不同管中，ｓｕｄａ．ｅｄｕ．ｃｎ
