残留溶剂顶空分析法
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方案制定
方案起草 签名 日期
方案审核
审核人意见 方案审核 生产部 质量保证部 工程部 物流控制部 质量控制部 日期
方案批准
批准人意见 方案批准 签名/日期
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验证小组人员名单
组长 姓名 职责 部门/职务 姓名 成员 职责 部门/职务
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目 录
1.概述---------------------------------------------- 2.参考资料--------------------------------------------- 3.色谱系统及色谱条件----------------------------------- 4.器材与试剂------------------------------------------- 5.人员培训情况----------------------------------------- 6.验证试验--------------------------------------------- 6.1系统适应性--------------------------------------- 6.2专属性------------------------------------------- 6.3线性及范围---------------------------------------- 6.4检测限-------------------------------------------- 6.5定量限-------------------------------------------- 6.6准确度-------------------------------------------- 6.7重复性-------------------------------------------- 6.8中间精密度---------------------------------------- 6.9耐用性-------------------------------------------- 7.偏差及变更处理---------------------------------------- 8.验证结果分析与评价------------------------------------ 9.附件---------------------------------------------------
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1. 概述
1.1根据ICH对药品中残留溶剂含量的要求及×××生产工艺，必须控制×××生产工艺中使用到的溶剂××、××和××的残留量。限度分别为： 1.2分析方法草案见附件。
1.3本分析方法属于杂质定量分析，因此需要验证的项目有：系统适应性、专属性、线性、准确度、检测限、定量限、精密度、耐用性。
2. 参考资料
ICH Q3C(R3), November 2005 ICH Q2(R1), November 2005
<467> Residual Solvent, United States Pharmacopoeia 31, February 2013
3. 色谱系统及色谱条件 3.1色谱系统
项目 GC主机 顶空进样器 自动液体进样器 工作站及版本号 校正有效期 第一台 Agilent 7890A Agilent G1888A Agilent 7683B Chemstation B.03.01 第二台 Agilent 7890A Agilent G1888A Agilent 7683B Chemstation B.03.01 第三台 Agilent 6890A Agilent 7694E Agilent 7683B Chemstation B.03.01 3.2色谱条件
GC参数 柱温 40℃保温20min，10℃/min升温至240℃，并在240℃保持20min 检测器温度℃ 250 进样口温度℃ 140 载气 N2 载气流速ml/min 4.8 分流比 10：1 运行时间 min 60 氢气流速ml/min 40 空气流速 ml/min 400 色谱柱型号 DB-624 检测器类型 FID 色谱柱规格 30m×0.53mm,3um 顶空进样器参数 平衡温度℃ 80 定量管温度℃ 90 传输线温度℃ 105 顶空瓶振摇方式 low 顶空瓶平衡时间min 45 加压时间min 0.5 定量管填充时间min 0.2 定量管平衡时间min 0.1 进样时间min 1.0 进样量ml 1.0 #########制 药 有 限 公 司
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4. 器材与试剂
名称 分析天平 分析天平 移液管 容量瓶 级别/规格 分度值0.01mg 分度值0.1mg A/1.0ml.10.0ml A/10ml,50ml,100ml 编号 校正有效期 厂家
品名 乙醇 丁酮 甲苯 DMF 供试品 批号 级别（纯度） AR AR AR AR EP 供应商/来源 有效期 5. 人员培训情况
在进行验证前，应对人员培训情况进行检查，所有相关人员在验证前均应经过相应的培训并考核合格。
6. 验证试验 6.1系统适应性
6.1.1目的：对由分析设备、实验操作、被分析供试品组成的完整的系统进行评估。
6.1.2接受标准：
计算标准溶液图谱中目标峰各检测参数：
6.1.2.1连续六次进样标准溶液所得图谱中目标峰峰面积RSD≤10% 6.1.2.2理论塔板数（N）：≥10000
6.1.2.3分离度（R）：≥2.0（残留溶剂间） 6.1.2.4拖尾因子（T）：≤2.0 6.1.3溶液配制 空白溶液：DMl
标准储备溶液：精密称取乙醇0.25g、丁酮0.25g、甲苯0.0445g、DMF0.044g
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置于已有20mlDMl的100.0ml容量瓶中，以DMl稀释至刻度，混匀。 标准溶液：移取标准储备溶液10.0ml，置100.0ml容量瓶中，用DMl稀释至刻度，混匀。即得乙醇250ug/ml、丁酮250ug/ml、甲苯44.5ug/ml、DMF44ug/ml。分别移取5.0ml空白溶液、标准溶液，置于顶空瓶中，密封，即得。 6.1.4分析
色谱系统稳定后，按下列顺序进样分析：
编号 1 2 名称 空白溶液 标准溶液 进样次数 1 6 6.2专属性
6.2.1目的：对分析方法准确可靠测定被分析物的能力进行测试。 6.2.2接受标准：
6.2.2.1空白溶液图谱中目标峰位置附近无显著干扰峰；
6.2.2.2供试品标准溶液图谱中目标峰与相邻峰的分离度应不小于1.5； 6.2.2.3对各残留溶剂出峰位置进行定位，用RRT表示。 6.2.3溶液配制
乙醇定位溶液：称取乙醇0.25g，置于已有20mlDMl的100ml容量瓶中，以DMl稀释至刻度，混匀。移取上述溶液10ml，置100ml容量瓶中，以DMl稀释至刻度，混匀。乙醇250ug/ml。
丁酮定位溶液：称取丁酮0.25g, 置于已有20mlDMl的100ml容量瓶中，以DMl稀释至刻度，混匀。移取上述溶液10ml，置100ml容量瓶中，以DMl稀释至刻度，混匀。丁酮250ug/ml。
DMF定位溶液：称取DMF0.44g，置于已有20mlDMl的100ml容量瓶中，以DMl稀释至刻度，混匀。移取上述溶液10ml，置100ml容量瓶中，以DMl稀释至刻度，混匀。DMF44ug/ml。
甲苯定位溶液：称取甲苯0.0445g，置于已有20mlDMl的100ml容量瓶中，以
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DMl稀释至刻度，混匀。移取上述溶液10ml，置100ml容量瓶中，以DMl稀释至刻度，混匀。甲苯44.5ug/ml。
标准溶液：配制同“5.1系统适应性”项下。
供试品标准溶液：称取0.25g供试品，置20ml顶空瓶中，向其中加入5.0ml标准溶液，密封，即得供试品标准溶液。
分别移取5.0ml空白溶液、标准溶液、各定位溶液，置于顶空瓶中，密封，即得。 6.2.4分析
色谱系统稳定后，按下列顺序进样分析：
编号 1 2 3 4 5 6 7 名称 空白溶液 标准溶液 乙醇定位溶液 丁酮定位溶液 甲苯定位溶液 DMF定位溶液 供试品标准溶液 进样次数 2 6 1 1 1 1 1 6.3定量限
在仪器系统稳定后，连续进样空白溶液3次，记录空白溶液图谱基线噪声值。按信噪比（S/N）在10-15范围的要求，配制定量溶液，进样3次，以下式计算信噪比（S/N）： S/N=2H/h
式中：H—定量限溶液图谱中待测残留溶剂峰高；
h—空白溶液图谱中在待测残留溶剂出峰位置附近的基线噪声，如有
可能，基线噪声范围应对称地覆盖待测残留溶剂出峰位置。
接受标准：残留溶剂定量限应不大于其其限度的50%，3次重复进样所得目标
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峰面积RSD不大于10%。 6.4检测限
在仪器系统稳定后，连续进样空白溶液3次，记录空白溶液图谱基线噪声值按
信噪比（S/N）3-5范围之内的要求，配制检测限溶液。信噪比（S/N）计算方法同“5.3定量限”项下。 6.5线性与范围
6.5.1目的：测试在给定的范围内，待测物的响应值与供试品中被分析物的浓
度呈正比例关系的程度。
6.5.2线性范围从各待测残留溶剂定量限到标准溶液溶度的120%，共8个点，
分别为：定量限、10%水平、20%水平、40%水平、60%水平、80%水平、100%水平、120%水平。残留溶剂线范围最低浓度应为定量限浓度；若残留溶剂定量限溶液图谱峰面积大于某浓度水平线性溶液图谱中残留溶剂峰面积，则该浓度水平溶液及以下各浓度水平溶液不计算。 6.5.3接受标准：
用峰面积和与其相对的浓度绘制标准曲线y=mx+b 计算残差平方和； |%bias|≤5%； 相关系数不小于0.99； 报告Y轴截距95%置信区间；
每个浓度水平溶液三次重复进样所得峰面积RSD不大于10%。 %bias=100b/(mc+b)
其中：C为100%水平线性溶液浓度，ug/ml m为线性曲线斜率; b为线性曲线Y轴截距 6.5.4溶液配制： 空白溶液：DMl。
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标准储备溶液：精密称取乙醇0.25g、丁酮0.25g、甲苯0.0445g、DMF0.044g
置于已有20mlDMl的100.0ml容量瓶中，以DMl稀释至刻度，混匀。其中乙醇2500ug/ml、丁酮2500ug/ml、甲苯445ug/ml、DMF440ug/ml。
标准溶液：移取标准储备溶液10.0ml，置100.0ml容量瓶中，用DMl稀释
至刻度，混匀。即得乙醇250ug/ml、丁酮250ug/ml、甲苯44.5ug/ml、DMF44ug/ml。 线性溶液：按照下列水平配制各水平线性溶液
水平（%） 标准储备溶液体积（ml） 120 100 80 60 40 20 10 定量限 6 5 4 3 2 1 1 —— 50 50 50 50 50 50 100 —— 容量瓶体积（ml） 乙醇 300 250 200 150 100 50 25 浓度（ug/ml） 丁酮 300 250 200 150 100 50 25 甲苯 53.4 44.5 35.6 26.7 17.8 8.9 4.45 DMF 52.8 44.0 35.2 26.4 17.6 8.8 4.4 按定量限浓度 6.5.5分析
在获得稳定地基线后，按下列顺序进样分析：
编号 1 2 3 4 5 6 名称 空白溶液 标准溶液 定量限溶液 10%线性溶液 20%线性溶液 40%线性溶液 进样次数 2 6 3 3 3 3 #########制 药 有 限 公 司
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7 8 9 10 11 12 标准溶液 60%线性溶液 80%线性溶液 100%线性溶液 120%线性溶液 标准溶液 1 3 3 3 3 1 6.6准确度
6.6.1目的：考察残留溶剂分析方法测定结果与真实值或参考值接近的程度。
6.6.2接受标准：
单一回收率应在80.0%-120.0%之间
各浓度水平内的回收率及各浓度水平回收率平均值之间的RSD不大于10.0% 报告平均回收率95%置信区间 6.6.3溶液配制 空白溶液：DMl
标准溶液：同“系统适应性”项下
80%稀释液：称取乙醇0.20g、丁酮0.20g、甲苯0.0356g、DMF0.0352g置于已有20mlDMl的100ml容量瓶中，以DMl稀释至刻度，移取上述溶液10ml，置100ml容量瓶中，用DMl稀释至刻度，混匀。
80%准确度溶液：称取供试品0.25g，置20ml顶空瓶中，加入80%稀释液5.0ml,密封瓶盖，即得。同法配制三份。
100%稀释液：称取乙醇0.25g、丁酮0.25g、甲苯0.0445g、DMF0.044g置于已有20mlDMl的100ml容量瓶中，以DMl稀释至刻度，移取上述溶液10ml，置100ml容量瓶中，用DMl稀释至刻度，混匀。
100%准确度溶液：称取供试品0.25g，置20ml顶空瓶中，加入100%稀释液5.0ml,密封瓶盖，即得。同法配制三份。
120%稀释液：称取乙醇0.30g、丁酮0.30g、甲苯0.0534g、DMF0.0528g置于
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已有20mlDMl的100ml容量瓶中，以DMl稀释至刻度，移取上述溶液10ml，置100ml容量瓶中，用DMl稀释至刻度，混匀。
120%准确度溶液：称取供试品0.25g，置20ml顶空瓶中，加入120%稀释液5.0ml,密封瓶盖，即得。同法配制三份。 6.6.4分析
在获得稳定的基线后，按下列顺序进样分析：
编号 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 名称 空白溶液 标准溶液 供试品溶液1 供试品溶液2 80%准确度溶液1 80%准确度溶液2 80%准确度溶液3 100%准确度溶液1 100%准确度溶液2 100%准确度溶液3 120%准确度溶液1 120%准确度溶液2 120%准确度溶液3 标准溶液 进样次数 1 6 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1
6.6.5计算
以外标法计算准确度溶液中残留溶剂的测得量，减去供试品中残留溶剂的量，以此差值除去加入的稀释液中残留溶剂量，即得回收率，计算公式如下： %回收率=（测得量-样品原有量）/(加入量)×100%=（CF×5-W×C）/(CA×P×
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5)×100
上式中：CF为准确度溶液各残留溶剂的测定浓度，ug/ml; W为供试品的称重，g；
C为供试品中残留溶剂的浓度，ug/ml； CA为加入的稀释液各残留溶剂的浓度，ug/ml； P为残留溶剂标准品纯度； 测试浓度CF=AF×CS×P/AS
上式中：AF为准确度溶液图谱中残留溶剂峰面积； AS为标准溶液图谱中残留溶剂峰面积； CS为标准溶液中各残留溶剂浓度，ug/ml
6.7重复性
6.7.1目的：在相同的操作条件下，测试在较短时间间隔的精密度。 6.7.2：接受标准：
连续六次进样标准溶液所得图谱中目标残留溶剂峰面积的RSD不超过10%。 6.7.3溶液配制 空白溶液：DMl
标准溶液：同“系统适应性”项下。 6.7.4分析
在获得稳定基线后，按下列顺序进样分析：
编号 1 2 名称 空白溶液 标准溶液 进样次数 2 6 6.8中间精密度
6.8.1目的：按照欧重复性实验的测定程序，在同一实验室，评价在改变实验员、日期条件下所得结果之间的精密度。 6.8.2接受标准：
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不同实验者、不同日期、不同仪器的测试结果对应的RSD分别不大于10%。 6.8.3不同日期测定：由实验员A、以仪器1不同日期1,2,3天按照重复性实验的测定程序测定。其溶液配制和进样顺序均同“重复性”项下。
6.8.4不同仪器测定：由实验员A，以仪器2按照重复性实验的测定程序测定。其溶液配制与进样顺序同“重复性”项下。
6.8.5不同实验员测定：由实验员B，以仪器1按照重复性实验的测定程序测定。其溶液配制和进样顺序同“重复性”项下。
6.9耐用性
6.9.1目的：确认在测定条件有微小变动时，测定结果不受影响的承受程度。 6.9.2接受标准：
各项改变测试结果均应满足系统适应性要求。 6.9.3柱温改变试验（±2%），其他条件不变。 原柱温：40℃
改变后柱温：（1）39℃ （2）41℃ 溶液配制：同“系统适应性”项下 分析进样：同“系统适应性”项下。
6.9.4改变载气流速（±5%），其他色谱条件不变。 原载气流速：4.8ml/min
改变后载气流速：（1）4.6ml/min (2)5.0ml/min 溶液配制：同“系统适应性”项下 分析进样：同“系统适应性”项下
6.9.5改变色谱柱批号，其他色谱条件不变。
用同一型号、不同批号的色谱柱对系统适应性进行测试 溶液配制：同“系统适应性”项下 分析进样：同“系统适应性”项下
7. 偏差及变更处理
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验证过程中如果验证的数据产生偏差，则应及时进行偏差调查，给出合理的偏差处理结果，并上报验证委员会，记录备案，后根据调查结果进行相应的处理。验证中若对已批准既定方案等变更，以及验证结束后决定对验证对象进行必要变更的，必须按照《变更控制管理规程》，履行严格的变更手续。变更结束后，应对那些可能影响产品质量、安全性或有效性的主要变更进行评估，确定是否需要变更后重新验证。
8. 验证结果分析及评价
验证小组根据数据分析，做出相应的评定与结论，报请验证委员会批准。
9.附件
附件1：分析方法草案 附件2：系统适用性检测结果 附件3：专属性检测结果 附件4：定量限检测结果 附件5：检测限检测结果 附件6：线性和范围检测结果 附件7：准确度检测结果 附件8：重复性检测结果 附件9：中间精密度检测结果 附件10：耐用性检测结果 附件11：偏差记录表 附件12：变更记录表
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附件2：
系统适用性检测结果
项目 可接受标准 基线平稳无干扰 空白溶液无干扰峰 系统适用性 阿西美辛 杂质B 分离度 检测结果 图谱号 结论 分析员/日期 复核人/日期
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附件3：
专属性检测结果
化合物 分离度 对照溶液 分离度溶液 相对于阿西保留时间（min） 保留时间(min) 美辛保留值 结论 分析员/日期 复核人/日期 图谱号
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附件4：
定量限检测结果
溶剂项目 结论 分析员/日期 信噪比（S/N） QOD(mg/mL) QOD相当于供试品中 残留溶剂含量(ppm) 复核人/日期
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附件5：
检测限检测结果
溶剂项目 信噪比（S/N） LOD(mg/mL) LOD相当于供试品中残留溶剂含量(ppm) 结论 分析人/日期 复核人/日期
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附件6：
线性和范围检测结果
残留溶剂名称 编号 峰面积 截距 斜率 相关系数 STD-25% STD-50% STD-75% STD-100% STD-125% 回归方程： STD-25% STD-50% STD-75% STD-100% 回归方程： 结论 分析人/日期 复核人/日期
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附件7：
准确度检测结果
溶剂项目 编号 实测值(ppm) 理论值 回收率 RSD 结论 分析人/日期 复核人/日期
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附件8：
重复性检测结果
重复性 残留溶剂名称 第一次 第二次 第三次 第四次 第五次 第六次 RSD（%） 结论 分析人/日期 复核人/日期 #########制 药 有 限 公 司
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附件10：
耐用性检测结果
批 号 有关物质 样品分析 耐用性 差值绝对值值 样品分析 耐用性 差值绝对值 样品分析 耐用性 差值绝对值 杂质A 杂质B 杂质C 杂质D 杂质E 杂质F 总杂质 #########制 药 有 限 公 司
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对照溶液b 图谱号 供试品溶液 空白溶液 对照溶液a 结论 分析员/日期： 复核人/日期： #########制 药 有 限 公 司
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附件11：
偏差记录表
偏差内容 报告人 偏差原因 偏差编号 #########制 药 有 限 公 司
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附件12：
变更记录表
变更原因 申请人 变更原因 变更编号
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