实验一:紫外-可见吸收光谱
令狐采学
一、 实验目的
1. 2. 3.
熟悉和掌握紫外-可见吸收光谱的使用方法 用紫外-可见吸收光谱测定某一位置样品浓度 定性判断和分析溶液中所含物质种类
二、 实验原理
紫外吸收光谱的波长范围在200~400,可见光吸收光谱的波长在400~800,两者都属于电子能谱,两者都可以用朗伯比尔(Lamber-Beer’s Law)定律来描述
A=ε bc
其中A为吸光度;ε为光被吸收的比例系数;c为吸光物质的浓度,单位mol/L;b为吸收层厚度,单位cm 有机化合物的紫外-可见吸收光谱,是其分子中外层价电子跃迁的结果,其中包括有形成单键的σ电子、有形成双键的π电子、有未成键的孤
对n电子。外层电子吸收紫外或者可见辐射后,就从基态向激发态(反键轨道)跃迁。主要有四种跃迁,所需能量ΔE
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大小顺序为σ→σ*>n→σ*>π→π>n→π*
吸收带 σ→σ* n→σ* 特征 主要发生在远紫外区 跃迁一般发生在150~250nm,因此在紫外区不易观察到 跃迁吸收带波长较长,孤立跃迁一般发生在200nm左右 跃迁一般发生在近紫外区(200~400nm) 典型基团 C-C、C-H(在紫外光区观测不到) -OH、-NH 2 、-X、-S π→π* 芳香环 C=O、C=S、-N=O、-N=N-、C=N ; n→π* 三、实验步骤
1、开机
打开紫外-可见分光光度计开关→开电脑→软件→联接→M(光谱方法)进行调节实验需要的参数:波长范围 700-365nm 扫描速度高速;采样间隔: 0.5nm 2、甲基紫的测定 (1)校准基线
将空白样品(水)放到比色槽中,点击“基线”键,进行基线校准
(2)标准曲线的测定
分别将5ug/ml、 10ug/ml 、15ug/ml 、20ug/ml甲基紫溶液移入比色皿(大约2/3处),放到比色槽中,点击“开始”键,进行扫描,保存 (3)测定试样
将试样甲基紫溶液移入比色皿(大约2/3处),放到比色槽中,点击“开始”键,进行扫描,保存
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3、甲基红的测定 (1)校准基线
将空白样品(乙醇)放到比色槽中,点击“基线”键,进行基线校准 (2)测定试样
将试样甲基紫溶液移入比色皿(大约2/3处),放到比色槽中,点击“开始”键,进行扫描,保存
四、 实验结果
1.未知浓度的测定
分别测定了5μg/ml,10μg/ml,15μg/ml,20μg/ml和未知浓度的甲基紫溶液的紫外吸收光谱,紫外吸收谱图如下:
甲基紫在580nm是达到最大吸收见下表:
浓度/μg*ml-1 吸光度 令狐采学创作
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5 10 15 20 未知 0.665 1.274 2.048 2.659 0.732 各浓度在580nm的吸光度
数据做成散点,结果显示,能很好的拟合直线如下图: 由计算机计算的拟合直线的关系为A = 0.135c - 0.027
故带入未知浓度的甲基紫溶液的吸光度0.732得浓度为5.622μg/ml-1
2.化合物的定性分析
已知甲基橙和甲基紫的结构式如下图所示:
甲基橙 甲基红
从图中可知,甲基紫约在580nm左右达到吸光度的最大值,而甲基橙溶液在410那么时达到吸光度最大值,这是由于甲基紫和甲基橙的结构不同造成的,由于甲基紫结构高度共轭,形成大π键,故最强吸收峰要的波长要比甲基橙的大(红移),同时由于高度共轭,吸光强度也有所增强。
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