磁珠提取DNA原理

磁珠纯化DNA道理之杨若古兰创作

分选磁珠的感化道理是基于一种固相载体可逆化固定（SPRI）的分离纯化方法.磁珠体系中普通包含：磁珠、DNA、聚乙二醇（PEG）、和盐离子等，在必定浓度的PEG和盐离子环境中，DNA可吸附到羧基润色的高分子磁珠概况（即固相载体），该过程是可逆的，在适当条件下，结合的DNA分子可以被洗脱回收.

纳米级此外磁珠概况性质分歧，分离道理也不尽不异，但基本上固态的球状材料构成并没有太大差别，基础结构普通分为3层，最内层的核心是聚苯乙烯、第二层包裹磁性物资——四氧化三铁（Fe3O4），最外层概况是羧基（-COOH）润色的高分子材料所构成，其中羧基行使与核酸结合的工作.

在全部体系中，PEG是影响DNA回收的决定性身分（其他身分还包含DNA大小和浓度、盐离子浓度、孵育时间等等）.DNA在必定浓度的PEG存在条件下，NaCl或MgCl2促进条件下，使DNA发生脱水反应，分子构象会发生急剧变更，由线状被紧缩构成卷曲球状，继而聚集沉淀，同时随PEG分子量、浓度和盐浓度的分歧，分歧长度的DNA可以被选择性的沉淀出来.在磁珠体系中，特定分子量的PEG的功能主如果与盐离子共同感化，改变分歧长度DNA的分子构象，同时添加体系的黏稠程度，使磁珠存在其中处于悬浮形态，不容易沉降，添加磁珠在空间地位的碰撞与排斥，从而添加核酸与磁珠的聚集效力与后果，除此以外，PEG与蛋白质具有相容性，也可去除样品中的蛋白质.

当处于PEG和盐离子环境中的DNA，因脱水感化而发生分子构象改变后，会流露出磷酸骨架上大量的带负电荷的磷酸基团，与概况带负电荷的羧基磁珠结合，但如何解释负负电荷之间的感化，目前还不得而知.但普遍认为，这是因为带正电荷的盐离子的感化（如Na+）.带负电的磷酸基团借由解离的盐离子（如Na+）与羧基构成离子桥，使DNA被特异性吸附到羧基磁珠概况.当PEG和盐类被去除以后，加入水性分子，会快速充分水化DNA，解除其三者之间的离子彼此感化，使得吸附到磁珠的DNA被纯化出来.

磁珠的出现，使得核酸制备的实验可以实现主动化，同时相较于传统的回收方式，还具有3个明显的上风：1）效力更高，以DNA为例，1μL磁珠的承载量可达7μg；2）防止使用无机溶剂，如酚类、氯仿等等，更加平安；3）操纵简单，无需离心，也更有益于保存核酸的完好性.

蛋白酶K具有降解蛋白的功能，而细胞膜主如果由蛋白质构成的富有弹性的半透性膜，是以蛋白酶K能够裂解细胞，从而DNA能够释放出来.

3. 无水乙醇沉淀DNA

用无水乙醇沉淀DNA，这是实验中最经常使用的沉淀DNA的方法.乙醇的长处是可以

任意比和水相混溶，乙醇与核酸不会起任何化学反应，对DNA很平安，是以是理想的沉淀剂.当加入乙醇时，乙醇会夺去DNA四周的水分子，使DNA失水而易于聚合.

采取Tris-HCl（pKa=8.0）的缓冲零碎，因为缓冲液是TrisH+/Tris，不存在金属离子的干扰感化，故在提取或保管DNA时，大都采取Tris-HCl零碎，而且TE缓冲液中的EDTA更能波动DNA的活性.

5.为何用酚与氯仿抽提DNA时，还要加少量的异戊酵？

在抽提DNA时，为了混合均匀，必须剧烈振荡容器数次，这时候在混合液内易发生气泡，气泡会禁止彼此间的充分感化.加入异戊醇能降低分子概况张力，所以能减少抽提过程中的泡沫发生.同时异戊醇有助于分相，使离心后的上层水相，中层变性蛋白相和基层无机溶剂相保持波动.